细胞培养实验中常用的试剂种类繁多,它们在实验中发挥着不同的作用。常见的试剂如斐林试剂,成分包括0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液),通过等体积混合后用于检测还原糖的存在,若存在则会呈现砖红色沉淀。
细胞培养基:包括无血清培养基、低血清培养基、高血清培养基等。 酶:如胰酶、凝血酶等,用于细胞的分离和传代。 抗生素:如青霉素、链霉素等,用于抑制细菌污染。 细胞因子:如重组人干扰素、重组人白细胞介素等,用于促进细胞生长和分化。
pH调整液的选择通常有HEPES液和NaHC03溶液。NaHC03溶液是培养基中必须添加的成分,以维持培养基在特定环境下的pH值。而HEPES液是一种弱酸,主要用于防止培养基pH迅速变动,对细胞无毒性。谷氨酰胺溶液在细胞代谢过程中起关键作用,是合成培养基的必需成分。
pH调整液,如HEPES液和NaHC03溶液,用于维持培养基pH稳定,其中NaHC03用于确保5%CO2环境下pH正确,而HEPES则防止pH突变。谷氨酰胺是细胞代谢必需的,因此在合成培养基时需添加。它应现用现配,100倍浓缩液配制后冷藏保存。
青、链霉素溶液:所用纯净水(双蒸水)需要15磅高压20分钟灭菌。 具体操作均在超净台内完成。青霉素是80万单位/瓶,用注射器加4ml灭菌双蒸水。链霉素是100万单位/瓶,加5ml灭菌双蒸水,即每毫升各为20万单位。 分装于-20℃保存。使用时溶入培养液中,使青链霉素的浓度最终为100单位/ml。
细胞聚集转移器:用于细胞聚集转移和构建三维细胞模型。细胞培养盖片:用于将细胞悬液撒在盖片上进行相关实验。无菌操作台和无菌耗材:用于无菌操作和培养实验中的无菌操作,如无菌手套、无菌吸头等。Coating试剂:用于涂覆培养皿或多孔板的表面,以促进细胞附着和生长。
细胞爆碎器和提取液:用于裂解细胞并提取蛋白质或核酸。蛋白质测定试剂盒和光度计:用于测定细胞培养物中的蛋白含量。细胞增殖试剂:如MTT试剂、CCK-8试剂等,用于测定细胞增殖能力。细胞凋亡检测试剂盒:用于检测细胞凋亡程度。低温冰箱、-80冰箱和液氮罐:主要用于试剂、细胞的保存。
生物实验室常用的耗材种类繁多,主要包括常规耗材、细胞培养类耗材、分子生物学实验耗材、微生物学实验耗材、过滤/净化实验耗材、仪器设备专用耗材以及试剂类耗材。常规耗材是生物实验室中最广泛使用的,它们具有通用性,包括各种玻璃器皿如试管、烧杯、量筒等,以及塑料制品如吸头、吸管、离心管等。
微生物实验室常用仪器有:恒温培养箱、霉菌培养箱、生化培养箱、超净工作台、高压灭菌器、烘箱、加热板、电炉、电子分析天平、磁力搅拌器、水浴锅、摇床、离心机、低温保存箱、移液器、PH计、分光光度计、光学显微镜、扫描显微镜、均质器等。
根据用途和监管办法,实验室耗材大致可以分为常规耗材、细胞培养类耗材、分子生物学实验耗材、微生物学实验耗材、过滤/净化实验耗材、仪器设备专用耗材和试剂类耗材等七大类。
显微镜:用于观察微小生物、细胞和分子结构,是实验室的基础仪器。 天平:用于测量物质质量,是实验室中不可或缺的测量工具。 pH计:用于测定溶液的酸碱度,是调节实验条件的关键设备。 恒温器:保持实验物质恒定温度,是进行实验的必备设备。
实验室耗材主要包括实验室仪器、试剂、耗材等。实验室仪器是实验室进行各种实验的基础设备,包括各种精密的测量仪器和实验装置。如天平、显微镜、分光光度计等。这些仪器是实验室进行实验的必备工具,对于实验的准确性和可靠性至关重要。试剂是实验室中不可或缺的物品,包括各种化学试剂、生物试剂等。
细胞培养实验中常用的试剂种类繁多,它们在实验中发挥着不同的作用。常见的试剂如斐林试剂,成分包括0.1g/ml NaOH(甲液)和0.05g/ml CuSO4(乙液),通过等体积混合后用于检测还原糖的存在,若存在则会呈现砖红色沉淀。
细胞培养基:包括无血清培养基、低血清培养基、高血清培养基等。 酶:如胰酶、凝血酶等,用于细胞的分离和传代。 抗生素:如青霉素、链霉素等,用于抑制细菌污染。 细胞因子:如重组人干扰素、重组人白细胞介素等,用于促进细胞生长和分化。
pH调整液的选择通常有HEPES液和NaHC03溶液。NaHC03溶液是培养基中必须添加的成分,以维持培养基在特定环境下的pH值。而HEPES液是一种弱酸,主要用于防止培养基pH迅速变动,对细胞无毒性。谷氨酰胺溶液在细胞代谢过程中起关键作用,是合成培养基的必需成分。
亚甲蓝或美蓝是重要的细胞核染料,溶解性好,应用于动物学和细胞学染色中,其优点在于不会导致染色过深。甲基绿作为碱性染料,绿色粉末状,能溶于水和酒精。在细胞学上,甲基绿常用于染色质的染色,并与酸性品红一起用于植物木质部的染色。
甲基绿:甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状,能溶于水(溶解度8%)和酒精(溶解度3%)。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂,细胞学上常用来染染色质,与酸性品红一起可作植物木质部的染色。
斐林试剂:与还原性糖反应,生成砖红色沉淀。 碘液:与淀粉反应,生成蓝色沉淀。 苏丹三:与脂肪反应,生成橘黄色;苏丹四与脂肪反应,生成红色。 双缩脲试剂:与蛋白质反应,生成紫色。 甲基绿:使DNA呈现绿色。 吡罗红:使RNA呈现红色。 健那绿:使线粒体呈现蓝绿色。
Hoechst 染色:Hoechst 可以穿过活细胞膜与细胞核结合,在紫外光下将核染色为蓝色。常用于观察细胞核。IP(碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。
星形胶质细胞系转染试剂:星形胶质细胞是生物体内的细胞,构成神经系统的一部分。所以这类转染试剂主要用于原代星形胶质细胞的转染。BMS2细胞系转染试剂:骨髓是大多数骨骼内部的柔性物质,在大骨骼中,它是新血细胞的来源。这类转染试剂是一种用于骨髓基质细胞(BMS) 的转染试剂。
在实验室质粒转染实验中,Lipo系列质粒转染试剂如赛默飞的Lipofectamine2000、3000,以及国内百代生物的lipofect5000、碧云天的lipo6000和lipo8000等,各有特色。尽管名字相似,但它们的成分和性能有所不同。
首先,我们测试了碧云天的Lipo293和Lipo8000,以及一个不知名品牌的试剂。转染前细胞密度达到80%,结果显示使用Lipo8000的细胞死亡最多,转染效率相对较好。相比之下,PEI的死亡细胞最少,但转染效率较低。令人意外的是,Lipo293虽然主要用于293细胞转染,但在实验中也能成功用于其他细胞。
Lipofectamine、fugene、磷酸钙、是较为常见的转染试剂,其实目前市场上的转染试剂盒针对某些转染进行了优化,使用起来较为方便。比如:细胞类型来自于 Lonza 系列的Amaxa 人单核细胞核因子试剂盒、Invitrogen的 Silencer(R) siRNA Transfection II Kit 等试剂盒在细胞转染方面都有着较好的效果。
赛默飞的Lipo3000、RNAi MAX、百代生物的RFect与RFect V2等是实验室常用的siRNA转染试剂品牌。其中,RNAi MAX是公认的权威产品,而RFect V2是RFect的最新升级版,因其优异的siRNA转染性能备受实验室好评。本文将简要对比分析RNAi MAX与RFect V2在siRNA转染性能、细胞毒性以及操作简便性方面的表现。
1、在进行细胞培养时,选择合适的培养用液至关重要,确保组织细胞在培养过程中能够正常生存、生长及进行各项操作。常用的细胞培养试剂包括超纯水、平衡盐溶液、消化液、pH调整液、谷氨酰胺溶液以及抗生素溶液等。超纯水的来源多样,可通过纯水机纯化、蒸馏水或离子交换水制得,或者使用三蒸水。
2、超纯水是基本的,常见的获取方法有纯水机纯化、蒸馏水和离子交换水,甚至是三蒸水。而平衡盐溶液则以无机盐和葡萄糖为核心,它保持细胞渗透压稳定,维持pH平衡,还提供基础营养。D-Hank’s溶液与Hank’s的区别在于不含Ca2+和Mg2+,常用于胰酶溶液的配置,且需用三蒸水溶解成分后过滤除菌。
3、细胞冻存前需更换培养基并观察细胞生长状况。收集细胞,计数浓度,配制冻存液,加入FBS和DMSO(细胞冻存保护剂),标记冻存信息,将冻存管放入冰箱或液氮罐中保存。确保DMSO为试剂级,使用新鲜无菌产品,并且注意其浓度和细胞种类的适宜范围。在冻存前和复温后,应及时洗涤DMSO,以防止其对细胞产生毒性。