本文目录：
- 1、镍柱纯化蛋白为什么加pmsf和dtt
- 2、DTT在多大浓度下可以打开二硫键?
- 3、dtt能再次把烷基化化的多肽蛋白还原吗
- 4、DTT的作用是什么,它对蛋白有哪些影响
- 5、dtt用什么溶解
- 6、DTT作用是什么
镍柱纯化蛋白为什么加pmsf和dtt
PMSF为蛋白酶抑制剂，在纯化过程中，为了防止细菌本身的蛋白酶降解待纯化的目的蛋白，通常在破碎菌体，上柱的过程中会加PMSF。使用时请注意防护，有毒。
加DTT是因为DTT是一种还原剂，可以打开蛋白质的二硫键，阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。避免His-tag被包裹在蛋白结构的内部导致目标蛋白不能结合镍柱。
PMSF 要摇匀至无结晶时才可与裂解，PMSF属于蛋白酶抑制剂，可以减少蛋白质的降解。
DTT在多大浓度下可以打开二硫键?
二硫键的打开关键是要有变性剂（6-8M 尿素），再在pH8--pH9条件下加入DTT（大于10mM），室温作用4小时以上即可。当然，容器需要用封口膜密封。
但是DTT量太高的话又会破坏掉二硫键。也就是说DTT浓度太低起不到保护作用，浓度太高又会破坏结构。所以如果一些蛋白需要添加的话一般是建议在0.5mM~5mM之间。以摩尔数计算，5-10倍的量来保护-SH。
也就是说DTT和2-ME的作用是一样的：可以防止蛋白质或酶等分子中的巯基氧化成二硫键，维持体系的还原性环境。β-巯基乙醇和DTT都是还原剂，防止蛋白质被氧化，β-巯基乙醇常用浓度为5-20MMOL/L，DTT为0.5-1MMOL/L。
补充一点：如果dtt和蛋白摩尔比例比例增大到1：100，DTT就能破坏2硫键了，这时对应的浓度一般在10mM左右，这个一般在做还原肽图的时候用到。不过有些分子 内的二硫键由于空间位阻的作用，还原剂的量增加到很大也不能破坏。
dtt能再次把烷基化化的多肽蛋白还原吗
1、我们可以重新提取一次，先排除是否是提取造成的差异；如果是样品本身的差异，建议用label free的方法，每个样品单独做定量，而不要用iTRAQ或TMT标记定量，否则会因为中间这个高丰度蛋白的影响，而导致定量不准。
2、根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。
3、二硫键的断裂。几条多肽链通过二硫键交联在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的-巯基乙醇处理，使二硫键还原为巯基，然后用烷基化试剂保护生成的巯基，以防止它重新被氧化。
4、最后还是用了液氮研磨的方法，研磨之后再加入裂解液，才提取出大量的蛋白。所以，对于细菌的样品，我们可以尝试多种方法，测试一下。
5、蛋白标签（Protein tag）技术是指利用基因克隆手段，将具有特定功能的多肽，蛋白质结构域，甚至完整蛋白质与目标蛋白融合在一起，以实现目标蛋白的表达纯化，检测和示踪等应用的技术。
DTT的作用是什么,它对蛋白有哪些影响
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部（溶剂不可及）的二硫键，这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性。
DTT作用如下：作为巯基化DNA的还原剂和保护剂。在DNA溶液中加入DTT，可以降低DNA的二聚化。用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
还原。根据查询元素反应资料显示，DTT在提取蛋白的时候是用来打破蛋白的二硫键，起还原作用。
将DTT添加到DNA溶液中，经过一段时间的反应后将其除去可以减少DNA的二聚化。DTT也常用于还原蛋白质中的二硫键。它可以用来防止蛋白质中半胱氨酸之间形成的分子内或分子间二硫键。
dtt用什么溶解
dtt用水溶解：DTTCI属于IR染料，它易溶于水和一些极性溶剂，你可以将它溶解在无水甲醇、无水乙醇这些质子溶剂里，也可以有限互溶于丙鲖、二氯甲烷和DMSO等非质子溶剂里。
mol/lDDT溶液配制方法：用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH2）溶解09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。注意：DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子 内或分子间二硫键。
DTT与巯基乙醇作用相似，是巯基化DNA的还原剂和去保护剂。1M DTT溶液，水溶解（1M DTT Solution， in Water）常作为基础成分用于还原蛋白质中二硫键，有抗氧化作用。DTT的刺激性气味和毒性比巯基乙醇低很多。
上海浩然生物技术有限公司 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）溶液 【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液（pH2）溶解09g DTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
DTT作用是什么
DTT的用途之一是用作硫醇化DNA的还原和去保护剂。巯基化的DNA末端硫原子倾向于在溶液中形成二聚体，尤其是在存在氧气的情况下。这种二聚化极大地降低了某些偶联反应实验的效率（例如生物传感器中DNA的固定）。
DTT作用如下：作为巯基化DNA的还原剂和保护剂。在DNA溶液中加入DTT，可以降低DNA的二聚化。用于蛋白质中二硫键的还原，可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
DTT为常用还原剂，有抗氧化作用。它能保护酶分子上的还原性基团，维持还原性环境，稳定酶的活性。