您关心的流式细胞术检测细胞凋亡(FITC-PI),来了!
为进行细胞凋亡的FITC-PI检测，首先收集要用于细胞凋亡检测的细胞，离心并去除培养基。然后，用PBS洗涤细胞一次，重悬于1×Binding Buffer中。对于对照组，使用400μL的1×Binding Buffer，其他处理组则使用100μL的1×Binding Buffer。
流式Annexin-FITC /PI双染法是一种常用的检测细胞凋亡的方法。在流式细胞术中，通过Annexin-FITC和PI对细胞进行染色，可以将细胞分为几个不同的象限，每个象限代表了细胞的不同状态。左下象限通常表示的是正常状态的细胞，这些细胞既不表达Annexin-FITC也不表达PI，表明它们没有经历凋亡过程。
流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是经典的细胞凋亡检测方法，基于凋亡早期细胞膜上磷脂酰丝氨酸（PS）从内侧翻转到表面这一原理。Annexin V-FITC标记有助于识别早期凋亡细胞，而PI-DNA复合物可用于检测所有阶段的细胞死亡。
最后，将细胞上流式细胞仪检测。细胞凋亡检测：细胞凋亡的早期就有细胞膜表面破损发生，破损时凋亡细胞表面的磷脂腺丝氨酸（PS）可以从细胞内膜翻转至细胞的外膜。该过程发生在DNA片段化之前，检测PS的表达，能反映早期凋亡。
annexin FITC/PI 双染试剂盒在染色时确实需要使用专门的buffer来稀释染色试剂，而不是直接使用PBS。因此，在进行染色之前，应当先对PBS进行离心处理，去除其中的杂质，然后再加入用buffer稀释的染色试剂，随后进行上机检测。
【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果该怎样分析
1、在进行流式细胞仪检测细胞凋亡时，我遇到了一些困惑。我使用的是AnnexinV-FITC凋亡试剂盒，采用AnnexinV/PI双染方法检测细胞凋亡。然而，当我得到凋亡散点图后，发现关于1，2，4象限代表的细胞类型说法不一。
2、手里的资料说法都不相同。试剂盒说明书：1代表细胞收集过程中机械性损伤的细胞，2 代表继发性坏死细胞，4代表凋亡细胞。有资料说：1代表坏死细胞，2代表晚期凋亡细胞，4代表早期凋亡细胞。我就不明白了，既然是凋亡，就算是晚期，细胞膜也会破坏？还有的认为，2象限代表晚期凋亡和继发性坏死的细胞。
3、细胞碎片较多：碎片增多可能源于细胞固定或渗透性处理不当，影响实验准确性。调整固定时间与渗透条件，确保细胞结构完整。0正常组阳性率异常：正常组阳性率过高可能由背景荧光过高、染色剂浓度不适当或样本处理不当引起。调整染色剂浓度，控制样本处理过程，减少背景干扰。
4、一般都是计数一个固定值，比如10000，然后得到每个GATE里面的比率。对比比率。每组多做几个样本。组间比例对比可以用T test。
5、细胞凋亡是一个快速过程，建议在染色后尽快进行分析，以减少时间对凋亡细胞状态的影响。通过掌握流式检测细胞凋亡的原理、操作技巧和数据分析方法，实验者可以更准确地评估细胞凋亡的水平，为疾病研究和治疗提供重要依据。同时，注意常见问题的解有助于提高实验结果的可靠性和准确性。
细胞主动性死亡--凋亡的检测方法
形态学检测通过光学显微镜观察细胞形态，Hoechst染色是常用的方法。正常细胞核在Hoechst染色后呈现蓝色，而凋亡细胞的细胞核则会密集染色，近乎白色。具体步骤包括：细胞固定、染色、洗涤并使用荧光显微镜观察。以碧云天公司的Hoechst染色试剂盒为例，操作涉及贴壁细胞、悬浮细胞和组织切片的处理过程。
HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有出芽现象。丫啶橙染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine， PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。
Annexin V和PI双染法是经典的细胞凋亡检测方法，基于凋亡早期细胞膜上磷脂酰丝氨酸（PS）从内侧翻转到表面这一原理。Annexin V-FITC标记有助于识别早期凋亡细胞，而PI-DNA复合物可用于检测所有阶段的细胞死亡。通过将这两种试剂结合使用，可以有效区分活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞。