太实用了!常用酸、碱、盐溶液配制方法大全
【配制实例】 在20ml蒸馏水中溶解15g CaCl2·6H2O，过滤后置-20℃保存。 11mol/L DTT溶液：20ml 0.01mol/L乙酸钠溶解09g DTT，过滤后冷藏。操作提示： DTT/含DTT溶液避免高压处理，操作时务必戴防护。
在配制时最好先用50℃的少量温水将各种无机盐类分别溶化，然后按照配方中所开列的物品顺序倒入装有相当于所定容量75%的水中，边倒边搅拌，最后将水加到足量。
使用的盐要先计量，确定一公斤产品用盐比例，然后放大到生产所需比例。2）、确定盐比例：从一公斤产品用盐比例放大到生产所需比例，会存在一定的计量误差，需要再次进行调整，调整方法：将生产的洗涤溶液打一公斤出来，加盐比例调整到最稠状态，就知道最终的盐比例是多少。
做WB时,蛋白上样加0.5M的DTT加多少?谢谢
DTT分子量为1525，如果你的上样体积是V得话，那么你就要称DTT的质量为1525*0.5*V。
而大分子蛋白在凝胶中易形成沉淀，因此需要在转膜缓冲液中加入0.1%SDS以提高溶解性。同时，降低甲醇浓度（低至10%或更低）有助于防止蛋白沉淀。使用4-20%高分辨率梯度预制胶可以同时兼顾大分子和小分子蛋白的分离。
在WB实验时使用内参，即可简便地对定量和上样步骤产生的误差进行校正。
变性过程通常需在100℃下水浴5分钟。非还原型缓冲液用于非变性凝胶电泳（Native-PAGE），蛋白质保持天然形状。此电泳类型适用于识别非连续氨基酸构成的三维结构表位的抗体。非还原型缓冲液不含SDS和DTT，因此无需加热变性样本。博士德提供多种蛋白上样缓冲液供选择，以满足不同实验需求。
Bradford法敏感度最高，且与一系列干扰Lowry、BCA 反应的还原剂（如DTT，巯基乙醇）相容，但是对去污剂依然是敏感的，其最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。另外，蛋白质定量以后进行电泳时需要等量上样，此步骤也存在操作误差。
SDS-PAGE电泳及Western试剂配制protocol
1、配制3 M醋酸钠（NaOAc）溶液。称取40.8 gNaOAc·3H2O于烧杯中，加入约40ml去离子水搅拌溶解，加冰醋酸调节pH值至2，定容至100 ml后高压灭菌并室温保存。制备5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）。称量所需试剂置于烧杯中，加入约900 ml去离子水搅拌溶解，定容至1L后室温保存。
2、双向电泳第二向—SDS-PAGE：1 配胶：根据分离胶和浓缩胶的剂量分别配置，确保溶剂和添加剂按比例准确加入。
3、SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳：制备分离胶（5ml/gel） 膜转移 1） 切胶，按Marker指示和目的条带的位置切胶（注意将胶切角做记号），将洗脱的胶浸入转膜缓冲液中15分钟。2） PVDF膜做好记号后先浸入甲醇中1分钟，再连同4张3mm滤纸和海绵浸入转移缓冲液中15分钟。
4、收集蛋白样品（Protein sample preparation）使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。