怎样鉴定细胞凋亡
1、显微镜观察，包括HE染色、吖啶橙染色、台盼蓝染色，通过光学或荧光显微镜观察，利用颜色或胞核胞质状态来判断细胞凋亡。Annexin V检测，是利用连接荧光染料的Annexin V与PS进行结合，检测细胞膜PS外翻，从而判定早期凋亡情况。
2、台盼蓝染色法也是一种常用的细胞检测方法。如果细胞膜不完整或破裂，台盼蓝染料会进入细胞，使其变蓝，这通常表示细胞坏死。相反，如果细胞膜保持完整，细胞则不会被台盼蓝染色，这表示细胞可能是正常细胞或处于凋亡状态。通过透射电镜观察，可以进一步了解凋亡细胞的超微结构变化。
3、细胞凋亡的鉴别方法 细胞凋亡的检测方法中，光学显微镜和倒置显微镜是一种常用的形态学检测方法。凋亡细胞的核染色质呈致密深染，形成致密质块，体积缩小，胞质致密、嗜酸性染色增强，可形成凋亡小体。但这种方法在细胞密集的组织中判断较困难，具有较强的主观性，重复性差，适用于凋亡现象的初步观察。
4、如何鉴别细胞凋亡？细胞凋亡检测方法多样，形态学方法是最常用的一种。通过光学显微镜或倒置显微镜观察，可发现凋亡细胞的核染色质致密深染，形成致密质块，有时可碎裂。细胞体积缩小，胞质致密、嗜酸性染色增强，并可形成凋亡小体，这些特征常以分散单个形式存在于组织中，与周围细胞分离，不引起炎症反应。
5、整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。 操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。
多克隆抗体与单克隆抗体有什么差异
单克隆抗体由单个B细胞亲本克隆产生，因此，只能识别单个抗原的特定的一个表位。单克隆抗体对靶向的抗原表位具有高度特异性，非特异性交叉反应性低，批间变异小。优点：a.不易产生批次间差异。
多克隆抗体与单克隆抗体之间的区别在于它们的定义、制备过程以及应用范围。单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一的抗体，仅识别某一特定抗原表位。而多克隆抗体是由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激，并可与多种抗原表位结合。
单克隆抗体是一个抗原表位刺激一个B细胞克隆增生而产生的单一抗体，而多克隆抗体是一种抗原的多个表位刺激多个B细胞克隆增生而产生的多种抗体混合物，所以前者比后者特异性要强得多。
单克隆抗体和多克隆抗体之间的差异不仅在于它们的来源，还在于它们的特异性和应用范围。单克隆抗体由于其高度特异性，在诊断和治疗中具有广泛的应用前景，而多克隆抗体则因其多样性和复杂性，在某些情况下也发挥着重要作用。
急切求解WB,IHC的意思!
WB指的是Western Blot，即Western免疫印迹法，用于检测蛋白质。它首先将蛋白质从细胞或组织中分离出来，并转移到膜上。然后，使用特定的抗体来检测目标蛋白的存在。对于已知的表达蛋白，可以使用相应的抗体作为第一抗体；对于新基因的表达产物，可以通过融合部分的抗体来检测。
DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。（二）IHC免疫组织化学 IHC免疫组织化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。
WB：whole blood 全血（即未经任何方式分部分离的血液）Western Blot，“Western免疫印迹法”。是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。
与IHC相比，Western blot在定量方面可能更为准确，同时可用于定性和定位，但敏感性低于IHC。ELISA与IHC相比，定量更为准确，是分泌性蛋白检测的首选方法之一，特别适合微定量分析多个样本，结果精确且试剂与样品用量较少。
WB，IHC，IP/ChIP类型抗体的区别在于：WB抗体用于检测加热变性后线性结构的蛋白；IHC在免疫组化中通过固定保持细胞形态，固定导致蛋白质变性凝固，不同于加热变性；IP/ChIP抗体则用于结合生理状态下的蛋白，因此最好使用纯化的天然蛋白制作的抗体。
WB和ELISA还有IHC（免疫组化）是目前国际上研究蛋白的主要手段和方法，他们三个分别用于蛋白的定性，定量和定位。当然WB既可以定性又可以半定量蛋白，既可以研究细胞又适用于组织，是目前最常用的蛋白检测方法。ELISA主要检测液态的样本，是定量较准确的方法。
怎么表征一个细胞上有特定的受体蛋白
1、免疫印迹（Western Blot）通过电泳和免疫检测技术验证和定量目标蛋白在细胞或组织中的表达水平。质谱分析 使用质谱技术分析细胞蛋白质的组成，可鉴定和定量目标蛋白。5共聚焦/超分辨率显微镜技术 观察蛋白质在单个细胞层面上的定位和动态行为。
2、蛋白质序列分析 利用生物信息学工具和数据库（例如NCBI、UniProt）获取蛋白质的氨基酸序列。进行序列比对，发现序列的保守区域或者特异性，通过多序列比对来分析蛋白质家族内的相关性。结构生物信息学分析 利用蛋白质结构数据库（例如PDB）获取或预测蛋白质的三维结构。
3、HER2（3+）是指人体中一种特殊的蛋白质，又称为“人类表皮生长因子受体2”（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2），是乳腺癌的一种表征。如果HER2在肿瘤细胞表面密度高于正常值，就被称为HER2（3+）。HER2（3+）通常与癌细胞的恶性程度相关，因为HER2在细胞生长和分裂过程中起着重要的作用。
4、差示扫描荧光法（DSF）是表征蛋白热稳定性的常用方法，广泛应用于多种研究领域。通过荧光染料或蛋白内源荧光信号监测升温过程中蛋白构象的变化，计算其熔解温度Tm。染料法DSF常用的SYPRO Orange染料，蛋白去折叠疏水区暴露时，荧光强度增加。无标记DSF则基于蛋白去折叠过程中色氨酸发射光谱的位移进行检测。
westernblot内参GAPDH成功了
今天，早早地过去，就是希望把westernblot的流程完成了。洗膜。1X TBST洗膜，这个我已经提前配置好了，没有压力。5minX3次。孵一抗。按照GAPDH说明书，1：4000稀释一抗。我还以为4ml的一抗稀释液要16ul的抗体。我一想，有点不合理吧。我买的GAPDH总共才25ul，一次性全部用了。
在Western Blot实验中，内参抗体作为标准参照物的重要性不言而喻。它们是衡量目的蛋白表达量的关键，通常选择表达稳定、不受外界因素影响的管家基因蛋白，例如β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B等。
在科学研究的精密战场上，每一步细节都关乎实验结果的准确性和可靠性。熊叔鸡汤告诉我们，理解原理并作出明智决策是关键。在Western blot实验中，选择合适的内参蛋白如同管家基因，能够确保表达的标准化和实验的稳定性。
在Western blot实验中，内参GAPDH的条带如果跑不齐，首先需要确认的是每个样品中GAPDH的表达量是否一致。虽然GAPDH作为持家基因，通常表达量稳定，但不同细菌的表达量可能有所不同，导致信号强弱不一。因此，可以使用考马斯亮蓝染色来检测上样量是否均匀，如果发现上样量有差异，应调整至一致后再进行实验。
关于westernblot的灰度分析?
在进行Western Blot实验时，测量结果通常使用面积（area）和密度（intensity）来量化条带。这些数值并非直接表示灰度值，而是指条带的物理面积或其在图像上的相对密度。这种方法在实验分析中是可行的。除了面积和密度，另一种量化条带的方法是通过光密度值。
首先，打开Image J软件，启动界面如图1所示。选择“File”“Open”，找到你需要分析的Western blot图片，如内参β-ACTIN，如图2所示。将图片转换为8位灰度图，操作路径为“Image”“Type”，如图3所示。接下来，对背景进行统一处理。
灰度分析是利用软件（一般western的照相软件都带这个功能）按照灰度的高低来定量分析样品中的蛋白表达的高低和差异，以解析度为单位。
步骤一：打开image J并加载图片。1 打开image J。2 通过“file- open- 找到图片”加载需要分析的图片。步骤二：将图片转换为灰度图并处理背景。3 将图片转换为灰度图：“image- type- 8 bit”。4 使用“process- Subtract Background”消除背景影响。
在细胞处理后的效果评估中，western blot常常用于分析基因表达蛋白的量的变化。通过半定量的灰度分析，我们可以了解特定处理对基因表达的影响。然而，条带深浅的直观判断可能受制于上样量的不一致性，因此，精确的灰度值计算和统计分析是关键。