3-ma自噬抑制剂处理时间
小时。3-MA是一种广泛应用于自噬研究的工具药物，抑制自噬的发生。3-MA的全名是3-甲基腺嘌呤，是一种广谱的酪氨酸激酶抑制剂，特定的机制，抑制细胞内的自噬过程。3-MA可以抑制细胞内的自噬前体体系形成。
mM的浓度使用浓度。3-MA最简单的溶解方法：0.015g溶于10ml培养基，37度培养箱放置2小时，即能溶解；一般现配现用，如果溶液状态4度放置可以一月。
PI3K抑制剂3-MA，即3-甲基腺嘌呤，特异性针对Vps34和PI3Kγ，其半抑制浓度（IC50）分别约为25 μM和60 μM。 3-MA能永久性地抑制I型PI3K的功能，而对III型PI3K的影响是暂时性的。此外，它对自噬体的形成具有抑制作用。
-Methyladenine是一种选择性PI3K抑制剂，作用于Vps34和PI3Kγ，IC50分别为25 μM和60 μM；永久抑制I型PI3K，但对III型PI3K的抑制是短暂的，也抑制自噬体的形成。
证明自噬在你的表型中起了关键作用：***加自噬抑制剂3-MA，激动剂rapamycin等，然后检测表型（功能）；这里就用到了两种自噬抑制剂：3-MA和CQ（Chloroquine）。
进一步揭示了LSS通过激活自噬抑制内皮细胞炎症的分子机制。LSS通过激活内皮细胞自噬抑制TNF-α诱导的炎症反应 为探索LSS、自噬与内皮细胞炎症之间的关系，选择HAECs和HUVECs作为体外模型，两种细胞类型均用12 dyn/cm2 LSS处理12小时，之后去除LSS使细胞恢复稳定培养24小时。
RNA修饰---mRNA修饰
1、假尿嘧啶（Ψ）作为RNA上含量丰富的修饰，对翻译过程的影响较为复杂，取决于其在mRNA中的位置和翻译体系。尽管在体内剪接和翻译中的作用尚不明确，Ψ修饰主要分布于CDS和3UTR区域，并影响mRNA的剪接、翻译过程和稳定性。
2、在RNA加工修饰mRNA的转录后加工过程中，mRNA经历了一系列精细的修改以确保其在细胞内的稳定性和功能性。这些修饰包括帽子添加、尾巴添加、剪接以及内部甲基化。这些步骤确保了mRNA能够有效地翻译成蛋白质。首先，加帽是指在mRNA的5-端加上m7GTP的结构。这一过程发生在细胞核内，对HnRNA进行加帽。
3、假尿嘧啶（ψ）是最丰富的RNA修饰，由尿苷异构化产生。mRNA上的假尿嘧啶化修饰可改变密码子，增强转录本稳定性，响应应激反应。2011年研究发现，mRNA上的假尿嘧啶化修饰能改变密码子。2014年，研究发现热休克时，额外引入超过200个假尿嘧啶修饰位点，敲除PUS7基因会减少这些含新引入修饰的mRNA。
4、真核生物的RNA在转录生成后，会经历一系列加工修饰过程，确保其功能正确。首先，RNA前体剪接去除内含子并连接外显子，形成成熟的mRNA。接着，mRNA的5端添加帽结构，提升翻译效率。随后，3端加上poly（A）尾巴，增强mRNA稳定性并促进翻译。此外，mRNA还会经历甲基化修饰，影响其稳定性与翻译效率。
蛋白激酶在自噬中的作用:用于靶向治疗的小分子化合物
1、科学家们巧妙地利用小分子化合物来调整这个精密系统，PI3K抑制剂和AKT抑制剂是调节者，而ULK1激活剂和ERK抑制剂则像调音师，精准地调整激酶间的平衡。AMPK、DAPK和PINK1等蛋白激酶，它们各自扮演着不同的角色，AMPK负责正向驱动，DAPK在关键环节起作用，而PINK1则可能通过假定激酶作用影响自噬进程。
2、蛋白激酶作为自噬的关键调节因子，也可以抑制自噬。目前，许多小分子化合物调节自噬来治疗人类疾病，尤其是癌症。FDA批准的第一个抑制自噬的药物是氯喹，它破坏溶酶体酸化以遏制自噬。越来越多的小分子通过调节自噬相关蛋白激酶参与了这一过程。
3、分子伴侣介导的自噬：在分子伴侣介导发生的自噬过程中， 其待降解的底物都是可溶性的蛋白质分子。分子伴侣蛋白识别带有特定氨基酸序列的底物蛋白质分子， 并与之结合， 然后再经溶酶体膜上的受体 Lamp2a（lysosome-associated membrane protein 2， Lamp2） 转运到溶酶体；底物蛋白分子再在溶酶体内， 被水解酶降解。
4、营养缺乏时，自噬活动增强，通过产生氨基酸维持器官功能；而胰高血糖素则诱导自噬，而胰岛素的作用相反，它能抑制自噬。细胞膨胀同样抑制自噬，机制涉及氨基酸浓度的改变。在哺乳动物细胞中，自噬的调控与磷酸化事件密切相关，如核糖体蛋白S6的磷酸化会刺激蛋白合成，抑制自噬进程。
5、Beclin1被ULK1磷酸化，并作为PI3K复合物的整体支架，促进自噬蛋白定位到自噬泡。Atg12-Atg5复合物：Atg5是参与自噬泡中吞噬细胞膜延伸的关键蛋白，与Atg12形成复合物。在Atg7的作用下，Atg12被激活；随后通过Atg10传递；最终Atg12与Atg5结合形成复合物。
PI3K抑制剂3-MA?
PI3K抑制剂3-MA，即3-甲基腺嘌呤，特异性针对Vps34和PI3Kγ，其半抑制浓度（IC50）分别约为25 μM和60 μM。 3-MA能永久性地抑制I型PI3K的功能，而对III型PI3K的影响是暂时性的。此外，它对自噬体的形成具有抑制作用。
-Methyladenine（3-甲基腺嘌呤，简称3-MA）是一种专门用于抑制PI3K（磷脂酰肌醇3激酶）的化合物。它被广泛用作自噬（细胞内废物清理过程）的抑制剂。此物质在科研领域被广泛应用。3-MA的化学结构如图1所示。
准备所需试剂与器材：PI3K抑制剂3-MA、溶剂、称量纸、微量加样器、试剂瓶等。 精确称量：使用精密天平，按照所需浓度，准确称量3-MA的剂量。 溶解与稀释：将称量的3-MA加入适量的溶剂中，搅拌至完全溶解，然后进行稀释至所需浓度。
-Methyladenine是一种选择性PI3K抑制剂，作用于Vps34和PI3Kγ，IC50分别为25 μM和60 μM；永久抑制I型PI3K，但对III型PI3K的抑制是短暂的，也抑制自噬体的形成。
目前，一系列新型AMPK激活剂已被证明可诱导自噬。3-甲基腺嘌呤（3-MA）、渥曼青霉素、LY294002等化合物是常见的自噬抑制剂，但其调节机制不同。3-MA通过抑制III类PI3K发挥抑制作用，而渥曼青霉素是一种高选择性的不可逆PI3K抑制剂，可阻断自噬。蛋白激酶作为自噬的关键调节因子，也可以抑制自噬。
PI3K/AKT/mTOR这一轴线的失衡，往往导致自噬被抑制，而药物如伊马替尼，通过激活或抑制相关激酶，可能成为治疗新策略。比如，AMPK激活剂3-MA和VPS34-IN1，以及抑制剂如氯喹，已经在临床前试验中展现出潜力，尽管耐药性问题仍待破解，但人工智能与生物技术的融合正为攻克这一难题带来曙光。
PPARα激动剂WY14643的预治疗降低了脂多糖处理小鼠心脏中线粒体功能...
1、最后，研究发现PPARα激动剂WY14643的预治疗可以降低脂多糖处理小鼠心脏中线粒体功能障碍引起的心肌病。因此，心肌细胞中的PPARα通过改善脂肪酸代谢和线粒体功能障碍，预防了感染性心肌病，强调了心肌细胞PPARα可能是心脏病治疗的潜在靶点。