如何构建稳转细胞株?

稳转细胞株的建立原理基于将外源DNA或shRNA克隆到含有抗性基因的载体上,该重组载体被转染至宿主细胞,并通过整合至染色体中,实现稳定遗传传递。载体中抗性基因的表达用于筛选成功整合的细胞。构建稳转细胞株具有显著优势: 精选种子细胞:维真生物的细胞来源于ATCC细胞库,代数低,确保细胞品质与无污染背景。

构建稳定细胞株有两种主要方式,一种是使用病毒载体介导的基因递送,另一种是利用质粒转染。使用病毒介导的基因递送通常会导致细胞的死亡或转化,因此它不适用于需要形成稳定表达的蛋白质的应用。因此,本文将重点介绍利用质粒转染构建细胞稳转株的方法。

稳转细胞株构建 选择宿主细胞系:选择能够稳定承载外源基因的细胞系作为宿主细胞。常用的细胞系包括HEK29CHO、HeLa等。构建表达载体:设计和构建包含目标基因的表达载体。在载体中通常包括启动子、选择标记基因(例如抗生素抗性基因)以及目标基因的编码序列。转染:将表达载体转染到宿主细胞中。

抗体亲和力成熟--艾柏森生物

抗体领域多年来致力于研究及实践亲和力成熟,以提升抗体特异性及效力,减少用药量,降低副作用。

基于抗体库的亲和力成熟策略也包括构建大库和小库。大库构建通过CDR(抗体可变区)区域的随机突变实现,而小库则集中突变于特定区域。突变区域的选择基于结构信息或胚系基因热点,通过预测抗体与抗原相互作用的关键位点来优化筛选过程。

亲和力成熟技术旨在通过模拟体细胞高频突变,如Ramos细胞系的持续突变或非B细胞系统的基因改造,提升抗体与靶点的结合强度。如Sarah等人利用Ramos细胞筛选出高亲和力的IgM,通过降低链霉亲和素密度,逐步提高筛选标准。杭海英课题组则在肺癌细胞中引入AID,实现抗TNF-α抗体的亲和力优化。

在抗体人源化策略上,艾柏森生物提供包括CDR&SDR移植、链替换以及人源IgG抗体库筛选等方法。对于抗体亲和力成熟策略,采用随机突变、定点突变等多种突变方式,并结合专有人类抗体数据库、电子建模等技术进行优化。

哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制最接近体内的天然形式,最容易保留生物活性,缺点是表达量通常较低,稳定细胞系建立技术难度大,生产成本高。艾柏森生物科技有限公司致力于基因、重组蛋白、抗体、噬菌体文库等生物制剂的研发,并致力于为客户提供一站式的CRO技术服务。

艾柏森生物科技有限公司致力于基因、重组蛋白、抗体、噬菌体文库等生物制剂的研发,并致力于为客户提供一站式的CRO技术服务。公司成立至今,以自主研发为核心,围绕大量专业技术人才,先后搭建了蛋白表达纯化平台、抗体定制平台、抗体工程平台、抗体药物平台、质量分析平台以及模式动物基因工程研究平台。

论述免疫球蛋白有哪些生物学活性

【答案】:免疫球蛋白具有多方面的生物学活性包括能与相应抗原特异性结合激活补体、结合细胞和通过胎盘。(1)与相应抗原特异性结合:免疫球蛋白能与相应抗原特异性结合,其结合部位在Fab片段的可变区。(2)激活补体:lgG(除IgG4外)和IgM与抗原结合后,可激活补体传统途径。

免疫球蛋白是一组具有抗体活性的蛋白质,主要存在于生物体血液和其他体液(包括组织液和外分泌液)中,可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。免疫球蛋白生物学活性有以下几种:①特异性结合抗原 特异性地与相应的抗原结合,如细菌、病毒、寄生虫、某些药物或侵入机体的其他异物。

具有抗原性:免疫球蛋白既具有抗体活性,又具有抗原性。这种双重特性使得免疫球蛋白能被免疫系统识别,并激发产生抗免疫球蛋白抗体。

抗体药物细胞库
回顶部