细胞培养基本方法(复苏、换液、传代、冻存)
首先，复苏步骤如下：从液氮取出冻存管，立即放入37℃水浴中融化，约1-5分钟后，用酒精消毒后放置在超净工作台上。
悬浮细胞：收集培养容器中的所有细胞悬液。250 g离心4 min后弃去上清。使用预热的完全培养基重悬，将细胞悬液接种到合适的培养容器中。（2）贴壁细胞：直接弃去培养容器中的上清，添加预热的完全培养基至原培养容器中。
用10ml PBS清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpm X 2min，弃上清液。加入1ml冻存液（90%血清，10%DMSO），放入冻存盒内（盒内有异丙醇，以保证温度降低的速度），立即放入-80℃冰箱中过夜。第二天，将细胞冻存盒放入液氮中保存，可保持至少两年。如不放入液氮，可保存三个月。
如果是带着冻存液一起接种的细胞应进行换液。 细胞换液 细胞换液是指去除旧的培养基，换成新的完全培养基以继续提供细胞充足的营养支持。当旧培养基 ph 值改变（含酚红的培养基通常是变酸发黄）时，需要及时进行换液。
检测细胞增殖的方法有哪些
细胞增殖检测方法主要包括五类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP浓度检测。选择哪种方法取决于研究的细胞类型和实验方案。首先来看DNA合成检测。这是目前实验室中最准确可靠的方法。实验中，我们使用放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一起孵育。
体内细胞增殖实验是在生物体内进行的实验，以研究细胞在体内的增殖情况。通常使用的技术包括放射性标记法和小动物活体成像技术。放射性标记法通过在体内注入标记了放射性的细胞，随后追踪这些细胞的增殖情况。小动物活体成像技术则可以直接观察体内细胞的生长和扩散过程。
MTT 法：这是一种经典方法。MTT 是一种黄色的四氮唑盐，活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将其还原为不溶性的蓝紫色结晶甲瓒，沉积在细胞中，死细胞则无此功能。通过酶标仪测定吸光度，可间接反映活细胞数量，从而了解细胞增殖情况。CCK-8 法：与 MTT 法类似，但更为便捷。
mtt实验中细胞处于什么状态时加入mtt
一般情况下，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。切记，在进行MTT试验前，如果营养不够的话，我们是在48h换液的，输入excel表，画出变化的曲线、二甲基亚砜。 ⒏避免血清干扰。 ⒌MTT法只能测定细胞相对数和相对活力。
孵育16-48小时后，使用倒置显微镜观察细胞状态。加入20ul的MTT溶液（0.5%浓度）进行4小时的继续培养。若反应正常，可先离心弃去培养液，用PBS清洗后加入MTT溶液。培养结束后，吸去孔内液体，加入150ul二甲基亚砜溶解结晶，测量各孔在OD490nm处的吸光值。对照孔设置包括调零孔、空白对照等，进行比对测量。
第二天：观察细胞生长状态，配制不同浓度梯度的样本溶液，加入96孔板，培养适当时间。第三天、第四天：解冻MTT，检测细胞生长状态，加入MTT溶液，培养4小时后，加入增溶溶液，振荡溶解，测量吸光度，处理分析结果。实验过程中需注意以下几点： 接种时细胞悬液需混匀，避免沉淀。
MTT法测定细胞活力时，如果细胞经过药物处理后立即加入MTT，应尽快测定结果。这是因为MTT与细胞在短时间内会发生反应，从而影响测定的准确性。为了验证这一点，我们曾做过实验对比，将细胞处理后放置几天再测定光吸收值，发现与首次测定的结果差异显著，无法准确反映实验情况。
添加MTT溶液：在细胞处理完毕后，加入一定量的MTT溶液。让细胞在含有MTT的培养环境中继续培养一段时间。这段时间内，活细胞会将MTT还原成甲瓒。 终止反应与离心处理：培养一定时间后终止反应，并通过离心去除上清液，留下细胞沉淀和甲瓒。
请问大神MTT测细胞增殖实验时,如果测一周时间,中间需要换液吗?具体怎...
1、测一周不换液细胞还能活吗？——MTT加进去之后只要4小时孵育时间就可加DMSO，之前的时间是刺激时间，应按实验要求自己掌握换液频率。
2、测ldh释放，长时间需要进行细胞换液 国外检测体外细胞毒性比较常用的方法有MTT比色法，XTT比色法，利用线粒体内部酶的活性，将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测 LDH法，通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性 其他还有细胞增殖度法，检测碱性磷酸酶活性等。
3、⒋培养时间。200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。⒌MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。
测ldh释放,长时间需要进行细胞换液吗
测定细菌对细胞的毒性试验最好用ldh还是mtt法⒈选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。
复苏细胞时要迅速进行，放入37℃水浴中震荡融化约1～2分钟，然后立即加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，去除DMSO和死亡破碎的细胞。细胞每天观察一次即可，但每次观察时间不宜过长。过滤除菌后培养基的pH值会有所改变，一般使用过滤除菌的1 M HCl或NaOH进行调节。
每3天半量换液或扩瓶一次，并补加重组人IL-2 300 U/ml；7在培养的第7d，收获CIK细胞，此时数量应达到1x 109个以上。8CIK细胞质控：1台盼蓝染色检测细胞活力：活细胞应在80%以上；2用流式细胞仪检测细胞表面CDCD8和CD56 等分子的表达，观察CD3+CD56+细胞的比例是否明显提高。
⒋培养时间。200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向g0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。⒌mtt法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做mtt时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致mtt比色od值的升高。