海星生物|细胞培养基知识科普(二)
在细胞培养过程中，抗生素的使用是关键步骤。为抑制细菌和真菌的污染，培养基通常会添加青霉素-链霉素双抗溶液，浓度分别为100U/ml青霉素和100μg/mL链霉素。转染实验时，需注意抗生素可能对细胞有毒性，应在实验前移除。谷氨酰胺作为能量来源和蛋白质合成的参与者，其在培养基中易分解，导致氨产生。
悬浮细胞：收集培养容器中的所有细胞悬液。250 g离心4 min后弃去上清。使用预热的完全培养基重悬，将细胞悬液接种到合适的培养容器中。（2）贴壁细胞：直接弃去培养容器中的上清，添加预热的完全培养基至原培养容器中。
g离心4 min，收集细胞沉淀，并接种至合适大小的培养器皿中，放置于培养箱内进行培养。24 h后显微镜下观察细胞状态，观察细胞时请拍100×、200×各2-3张照片进行留存，所拍照片应该尽量清晰。，并根据汇合度继续培养或消化传代。
海星生物公司致力于细胞研究和应用，其生产的细胞具有优秀的质量和稳定的性能，通过严格的质量控制和先进的技术手段，海星生物公司确保细胞的纯度、完整性和可靠性。
传代比例：1：3-1：4，每2-3天换液一次 传代周期：48-72 h 培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃ 冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存 质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性 H9C2细胞复苏流程推荐使用海星生物H9C2细胞配套专用培养基（货号：TCR-G607（1）。
如何添加MEM培养基中补充成分
配置前准备：配置培养基新制备的milli water。调节pH值的酸碱溶液也应该使用这种水配置。制备培养基的器皿清洗干净，并用milli water润洗两次。溶解培养基：取5%终体积的milli water，加入到1L玻璃杯中，将干粉培养基倒入烧杯，水洗包装袋内面两次，倒入培养液中。磁力搅拌助溶。
在培养caco-2细胞时，为了维持适宜的pH值，常常需要向这些培养基中加入一定量的碳酸氢钠。具体而言，对于MEM培养基，推荐每升添加2克碳酸氢钠；对于DMEM培养基，每升则应添加5克；EMEM培养基每升添加5克；而1640培养基同样每升添加5克。
在培养海马神经元时，首先需要使用含有血清的培养液进行接种，待神经元稳定黏附于培养底物后，再转换为不含血清的培养液。接种用的培养液配方包含600mg/ml葡萄糖的MEM培养基，再加入10％的马血清。除了基本的培养基外，还需添加一些特定的补充成分，以确保神经元的健康生长。
每升培养基应加入2克碳酸氢钠。随后，用水稀释至最终容积，并充分搅拌以确保溶解。避免过度搅拌。调整培养基的pH值，应比随后使用的pH值低0.2到0.3。调整pH值时，使用1N NaOH 和 1N HCl，边搅拌边缓慢添加。调整完成后，封闭容器直至过滤。紧接着，立即使用膜进行消毒。
MSC细胞成骨诱导与茜素红染色
间充质干细胞（MSC）具有分化为多种细胞类型的能力。本文将介绍MSC细胞进行成骨诱导实验以及使用茜素红染色鉴定成骨细胞分化的具体步骤。成骨诱导过程中，MSC转化为成骨细胞，细胞表面形成钙结节，钙离子与茜素红形成螯合物，显现出红色或紫红色。进行成骨诱导实验的第一步是准备诱导培养基。
茜素红染色步骤如下：去除诱导培养基，取出细胞爬片至载玻片上，用PBS洗两次，加入4%多聚甲醛固定30分钟。吸去固定液，用PBS洗两次，滴加适量茜素红染色3~5分钟。去除染色液，用PBS洗两次，干燥后封片，通过显微镜观察并拍照。
成骨诱导的最终阶段是茜素红染色，以鉴定成骨细胞的分化。首先，移除诱导培养基，将细胞爬片转移至载玻片上，用PBS清洗两次后，将细胞固定30分钟。接着，用PBS清洗两次，滴加适量茜素红染色液3~5分钟后去除染色液，再用PBS清洗两次，干燥后封片。在显微镜下观察并拍照，以显示成骨细胞的钙盐沉积。