怎样从血液中分离出B淋巴细胞?
无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。 用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中（血液：Hanks液：淋巴细胞分离液的比例为1：1：1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面。
B淋巴细胞的祖细胞最初在胚胎小鼠14天大的胎肝中找到，这里构成了造血细胞岛。此后，随着胚胎的发育，B淋巴细胞的产生和分化的主要场所逐渐转移到了骨髓中。这意味着，在正常生理状态下，B淋巴细胞的成熟是在骨髓环境中发生的。骨髓瘤细胞则来源于实验动物的骨髓。
PBMC分离方法是一种生物技术，它可以将多种血液成分（如红细胞、血小板和淋巴细胞）分离出来，从而获得血液中纯的单克隆T细胞。PBMC分离方法的原理是基于血液成分不同的密度，通过在双重密度梯度中离心，利用较低密度部分的小分子浮力将红细胞沉淀，从而获得纯化的单克隆T细胞。
ficoll密度梯度离心法
1、Ficoll密度梯度离心法是一种常用的分离外周血单个核细胞（PBMC）的方法。其原理基于不同细胞在Ficoll溶液中的沉降系数不同，从而实现细胞的分离。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，平均分子量为400，000，当密度为2g/mL时，既不会超出正常生理性渗透压，也不会穿过生物膜。
2、原理： 密度差分层：Ficoll密度梯度离心法利用Ficoll溶液的密度特性，将血液中的细胞按照比重进行分层。Ficoll是一种中性多聚糖，其密度适宜且不会破坏细胞。 细胞分离：在离心过程中，红细胞和粒细胞因比重较大而沉积在试管底部，而淋巴细胞、单核细胞等PBMC则位于液面或悬浮于Ficoll分层液中。
3、Ficoll密度梯度离心法是一种常用的外周血单个核细胞（PBMC）提取技术。该方法利用Ficoll溶液的密度差，将血液中的细胞按照比重进行分层，从而分离出淋巴细胞、单核细胞等PBMC。Ficoll是一种中性多聚糖，其密度适宜，不会破坏细胞。
4、考点：密度梯度离心法。[解析]葡聚糖一泛影葡胺（Ficoll）等密度梯度离心法是利用一种密度介于075～092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。
5、在流式细胞术前，通常使用Ficoll密度梯度离心法从外周血中分离PBMC。该方法通过离心将血液分为三层：上层为血浆，中层为含有PBMC的Ficoll，最下层为红细胞。PBMC位于中层，需要小心吸取并进行后续处理。
6、利用 Ficoll 作密度梯度离心时，各种血液成分将按密度梯度重新分布聚集：血浆和血小板密度较低，悬浮于分离液的上部；红细胞与粒细胞密度较大，沉于分离液的底部；PBMC 密度稍低于分离液，位于分离液界面之上，移去上层组分就可获得 PBMC。根据细胞密度的不同进行分离。
Destiny|Percoll?Ficoll?傻傻分不清楚
1、应用范围：Percoll不仅可用于科研实验中的细胞分离，还可用于临床研究。其中，Percoll Plus是共价偶联烷硅涂层硅胶，性质更加稳定，内毒素含量较低，有法规文件支持，可以用于临床研究；而Percoll则仅能用于科研。
2、细胞分离产品主要分为Percoll和Ficoll两种。Percoll的应用范围较广，不仅适用于分离不同密度的细胞，还可分离亚细胞器和病毒，可实现从02-3 g/ml范围内的密度梯度离心分离。而Ficoll则是用来分离特定密度细胞的分离液（077， 084 和 073 g/mL三款），适用于已知密度细胞的分离。
3、Percoll与Ficoll的深度详解如下：Percoll： 应用范围：广泛适用于不同密度的细胞分离，包括亚细胞器和病毒的分离，其密度范围在023 g/ml。 离心要求：离心过程中要求慢升慢降，通常使用3级加速度。 保存与无菌性：未开封时可在室温下保存5年；开封后短期内可存于48℃，使用前先放置至常温。
E花环实验的原理
E花环实验的原理如下：T细胞表面受体特性：人外周血中的T淋巴细胞表面具有特定的绵羊红细胞受体。花环形成：这些T淋巴细胞能够与SRBC结合，形成花环样细胞团，即E花环。T细胞计数与免疫状况判断：通过观察和计数E花环的数量，可以判断T细胞的数量，从而进一步评估机体的细胞免疫状况。花环类型：总花环：在4℃条件下放置1小时以上所形成的花环，代表T细胞的总数。
实验原理：人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞（SRBC）受体，能够与SRBC结合形成花环样细胞团（即E花环）。此试验用于计数T细胞数量，可判断机体细胞免疫状况。
e花环实验原理如下：免疫学上用来检测T细胞数量的一种实验方法，T细胞表面具有能与绵羊红细胞（SRBC）表面糖肽结合的受体，称为E受体（CD2）。CD2是一种糖蛋白，相对分子质量为30000～60 000，已证实E受体是人类T细胞所特有的表面标志。当T细胞与SRBC混合后，SRBC便粘附于T细胞表面，呈现花环状。
人外周血T淋巴细胞表面具有绵羊红细胞受体，在体外一定条件下将人淋巴细胞与绵羊红细胞两者混合，可以形成以T细胞为中心，周围黏附着多个绵羊红细胞的花环，为E花环试验（erythrocyte rosette test）。应用最广的有总E花环试验（Et，t为total的缩写）和活性E花环试验（Ea，a为active 的缩写）。
E花环沉淀分离技术：利用细胞表面的特定受体与相应配体的结合进行分离。免疫磁珠法分离：基于细胞表面抗原与连接有磁珠的特异性单抗相结合的原理，通过磁场进行分离。流式细胞术分离法：利用流式细胞仪对细胞进行高速、精确的分离。补体细胞毒分离法：利用补体对特定细胞的毒性作用进行分离。
细胞免疫的体外检测方法 T细胞计数： E花环法：虽已主要用于分离T细胞，但原理上可用于计数T细胞。 单克隆抗体计数法：使用特定的单克隆抗体标记T细胞，并通过流式细胞仪或荧光显微镜进行计数。T细胞活化试验：通过检测T细胞在特定刺激下的转化率和增殖反应来评估其功能。