由十六醇经溴素溴化后与三甲胺反应生成季铵盐。将三甲胺水溶液投入汽化釜中,加热至沸,产生的三甲胺气体经干燥后用丙酮吸收,在吸收塔中生成三甲胺丙酮溶液,使其进入季铵化釜。然后在搅拌下滴加溴代十六烷,二者摩尔比为10︰1。滴加过程中保温30~40℃,滴毕后再保温搅拌1 h。
十六烷基三甲基溴化铵的生产过程首先是从十六醇开始。通过溴素的溴化反应,十六醇进一步转化为相应的季铵盐。在这个步骤中,三甲胺水溶液被加热至沸腾,产生的三甲胺气体经过干燥处理,然后用丙酮进行吸收,这一过程在吸收塔中进行,生成了三甲胺丙酮溶液。接着,该溶液被引入季铵化釜中。
CTAB法是一种广泛应用的DNA提取方法。实验原理基于CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)能够与DNA形成复合物,该复合物在高浓度氯化钠溶液中稳定存在,而大多数蛋白质、多糖仍溶于溶液中。通过离心去除上清液,CTAB-DNA复合物可被沉淀,随后使用75%乙醇处理去除CTAB。
CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸。
搅拌下将十六醇和红磷水浴加热混合溶解后,滴入溴,控制温度不超过100℃,加完后升温至100℃赶出溴化氢气体,然后冷却,并将反应液倒入水中。
中性洗涤剂就是指非离子表面活性剂。定义在水溶液中不产生离子的表面活性剂。非离子表面活性剂在水中的溶度是由于分子中具有强亲水性的官能团。 非离子表面活性剂在数量上仅次于阴离子表面活性剂,是一类大量使用的重要品种,随着石油工业的发展,所用原料环氧乙烷成本的不断降低,它的产量还会不断提高。
中性洗涤纤维:饲料样本在中型洗涤剂十二烷基硫酸钠处理下不溶解的部分包括半纤维素纤维素、木质素、矿物质。
需测定的物品经中性洗涤剂煮沸处理,不溶解的残渣为中性洗涤纤维,主要为细胞壁成分,其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。植物性饲料经酸性洗涤剂处理,剩余的残渣为酸性洗涤纤维,其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
洗至滤液呈中性为止。用 20ml 丙酮冲洗二次,抽滤。将玻璃坩埚置于 105℃烘箱中烘 2h 后,在干燥器中冷却 30 min称重,直称至恒重。2 酸性洗涤纤维测定 准确称取 000g 样品(通过 40 目筛)置于直筒烧杯中,加入 100 ml 酸性洗涤剂和数 滴十氢化萘及 0.5g 无水亚硫酸钠。
1、使细胞膜破裂。液氮研磨组织提取dna主要是将新鲜的叶片在液氮中研磨,以机械力破碎细胞壁,然后加入十六烷三甲基-溴化铵分离缓冲液,使细胞膜破裂,才能提取到dna。这是一种快速简便提取植物总DNA的方法,也是实验中常用的方法。
2、植物细胞有细胞壁,液氮可以让细胞冷冻起来,变得很脆,这样容易破细胞壁。同时,液氮的超低温可以大大降低酶活性,防止降解 。
3、原理就是去掉植物细胞壁 细胞膜 质体 线粒体 叶绿体 剩下细胞核了。就是DNA了。通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。
4、弃上清液,加入DNA Hydration Solution 50ul, 充分混匀,65℃5min使DNA 完全溶解。 紫外分光光度计测定OD260/280,比值大于8即可。(二)、从组织中提取DNA 取液氮冷冻的叶片2-3片, 在液氮冷冻下迅速研磨成粉末。
5、沉淀DNA,需在冷乙醇或异丙醇中沉淀,放在冰箱-20℃沉淀30分钟以上,原理是DNA在醇中不可溶而黏在一起发生沉淀。