密度梯度分离概论
1、密度梯度分离是一种利用样品组分在特定梯度液中因密度差异而产生的沉降速率差异进行分离的技术。在速率区带离心中，混合样品以薄层形式置于梯度液顶部，离心过程中，由于各组分的沉降速率不同，会形成多个分离的区带。当密度最大的样品完全沉降前停止离心，收集样品并与梯度液分离，得到纯化组分。
2、用简易的差分离心结合各种型式的密度梯度离心可以分离和纯化各种亚细胞器。研究者也可以根据自己的设备情况对实验 参数作一定的改动，也可以更多地利用速率--区带密度梯度离心或等密度离心来简化实验过程和提高分离纯度。
3、在云盘内，离太阳距离为r、离赤道面距离为z处，在云盘自转轴z轴方向上，受到三种力的作用——太阳引力、云盘引力和气体压力。当云盘密度比罗奇密度小许多时，云盘引力可以不计，因此在z方向上处于流体静平衡状态，即 dp/dz=—ρg 式中：左端为流体静压力梯度，可由物态方程得到；右端为太阳引力。
4、设圆柱体长度为2L，半径为R，中轴线埋深为D，剩余密度为Δσ，则单位长度圆柱体内的剩余质量称为剩余线密度λ 地球物理勘探概论 S为圆柱体截面积，因而λ=Δσ·πR2。
密度梯度离心的优点?
1、此法的优点是：①分离效果好，可一次获得较纯颗粒；②适应范围广，能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒；③颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。
2、密度梯度离心利用介质如氯化铯、蔗糖或多聚蔗糖制造梯度，将混合物中颗粒分离。此法优点包括高分辨率、分离效果好、一次获得较纯颗粒，适用范围广且颗粒不积压、变形，保持活性，防止混合。但需注意离心时间长，需制备梯度液，操作需严格控制。密度梯度离心主要分为速率区带离心法和等密度区带离心法。
3、等密度离心法的分离效率取决于样品颗粒的浮力密度差，密度差越大，分离效果越好，与颗粒大小和形状无关，但大小和形状决定着达到平衡的速度、时间和区带宽度。等密度区带离心法所用的梯度介质通常为氯化绝CSCl，其密度可达7 g/cm3。
4、此法的优点是：分离效果好，可一次获得较纯颗粒；适应范围广，能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒；颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性，并防止已形成的区带由于对流而引起混合。此法的缺点是：离心时间较长；需要制备惰性梯度介质溶液；操作严格，不易掌握。
5、密度梯度离心法的优缺点 优点是：①分离效果好，可一次获得较纯颗粒；②适应范围广，能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒，又能分离有一定浮力密度差的颗粒；③颗粒不会挤压变形，能保持颗粒活性。缺点是：①离心时间较长；②需要制备惰性梯度介质溶液；③操作严格，不易掌握。
6、离心后，大分子会形成层次分明的沉降。如果样本含有不同沉降系数的成分，会形成多层，通过编号取样进行后续研究。这种技术与一般的沉降速度法不同，主要优势在于能直接取出分离物。由于广泛使用蔗糖密度梯度，因此也称作蔗糖密度梯度离心法。同样原理，分析超离心机也可用于相关的测定工作。
密度梯度离心和差速离心的区别
区别一：定义不同 差速离心法：差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。起始的离心速度较低，让较大的颗粒沉降到管底，小的颗粒仍然悬浮在上清液中。收集沉淀，改用较高的离心速度离心悬浮液，将较小的颗粒沉降，以此类推，达到分离不同大小颗粒的目的。
差速离心用两个甚至更多的转速，而密度梯度离心只用一个离心转速。 差速离心是适用于混合样品中各沉降系数差别较大的组分，而密度梯度离心的物质是密度有一定差异的。差速离心法 差速离心法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。
两者区别有定义不同、原理不同。定义不同：密度梯度离心是利用细胞在连续或不连续的密度梯度介质中沉降，形成不同的沉降锋，从而实现样品的分离。差速离心主要是采取逐渐提高离心速度的方法分离不同大小的细胞器。
这两者的区别有原理、转速和离心阶段、分离目标。原理：密度梯度离心的这种方法是在离心管中预先建立一个连续或不连续的密度梯度介质后将样品悬浮在梯度介质的顶部进行离心。
差速离心法是用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离。⒉密度梯度离心只用一个离心转速，而差速离心用两个甚至更多的转速。⒊密度梯度离心的物质是密度有一定差异的，而差速离心是适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分。
差速离心法和密度梯度离心法是两种常见的细胞外囊泡分离技术。差速离心法基于粒子在离心场中的沉降速度差异进行分离，通过调整离心条件，实现按大小或密度分级。密度梯度离心法则利用预设的密度梯度介质，使得不同密度的粒子在离心过程中逐渐沉降至各自对应的密度层。
实验室常用的密度梯度离心法介绍
密度梯度离心主要分为速率区带离心法和等密度区带离心法。速率区带离心法用于分离密度相近、大小不等的细胞或细胞器。离心时，混合样品中不同组分在梯度液柱不同位置形成各自的区带，实现彼此分离。
速度区带离心法：离心前，样品被放置在梯度液的顶部，利用颗粒在不同密度梯度层中沉降速度的差异，将具有不同沉降速度的生物样品，如细胞、病毒、染色体、脂蛋白、DNA和RNA等，分离开来。2）预制梯度等密度离心法：需要在离心前准备一个从底部到顶部密度逐渐变稀的梯度。
密度梯度离心法是实验室中分离和纯化生物分子的一种常用技术。在进行离心前，样品需被小心地铺设在密度梯度溶液的表面，离心后形成一系列清晰的、不连续的区带。区带中包含不同大小、形状和沉降系数的颗粒，可以通过虹吸、穿刺或切割离心管的方法，将不同区带中的颗粒分开收集，以获得所需的物质。
密度梯度离心法是使待分离样品在密度梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡，最终分配到梯度中某些特定位置上，形成不同区带的分离方法，又称区带离心。密度梯度离心不仅可依据样品颗粒的重量及沉降系数进行分离，还可根据样品颗粒的密度、形状等特征进行分离。
在实验过程中，由于样品的各种性质差异，只有选择了正确的离心方法，才能获得预期的分离纯化结果。常用的离心方法主要有差速离心法、密度梯度离心法。其中密度梯度离心法又可细分为速率区带离心和等密度梯度离心法。本期向大家具体介绍离心方法之差速离心。
细胞纯化分离—密度梯度篇
1、细胞纯化分离技术中，密度梯度法占据重要地位。单细胞测序因其能揭示混杂样品中隐藏的异质性信息而备受关注，这有助于研究细胞发育和调控机制。关键步骤是获得高纯度和完整细胞（核）悬液，这对于后续生信分析至关重要。
2、细胞纯化分离是单细胞测序的关键步骤，根据不同样本类型和实验目的，常用密度梯度离心和流式分选技术。密度梯度离心基于细胞密度差异进行分选，适用于细胞体积和密度差异较大样本，具有局限性。流式分选则利用流式细胞仪，通过荧光标记物实现精确性和灵活性的细胞分选，优于密度梯度离心。
3、密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理是：常用来分离人外周血单个核细胞（PBMC）的分层液比重是077±0.001的聚蔗糖（Ficoll）-泛影葡胺（Urografin）（F／H）分层液。Ficoll是蔗糖的多聚体，呈中性，_W水性高，平均分子量为400，000，当密度为2g／ml仍未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。
4、密度梯度离心是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度。密度梯度离心是将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分层、分离。这类分离又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种。密度梯度离心常用的介质为氯化铯，蔗糖和多聚蔗糖。