请教高手关于从细胞中提取总RNA
1、常用的比如glycogen，酵母RNA 或者 tRNA，henry DNA，鲑鱼精子DNA，线性丙烯酰胺等等 carrier DNA也是RNA，只不过是不会干扰你的目标RNA的理化性质，但总RNA浓度肯定是变了，提取的核酸中有多少是你的目标RNA，不知道，但只知道里面有。
2、博凌科为-为你解逆转录时总RNA的量对cDNA、PCR结果看你是准备用cDNA来做什么用。一般来说，如果后面做绝对定量，有影响，如果只是PCR，除了同样循环次数条带亮度不同，可能没有其他影响。
3、RT-PCR应具备的条件高质量的RNA（保留后可做5，3RACE）；引物的（最好产物短点）；若涉及粗略定量的话还应考虑RNA的浓度或是cDNA的浓度（如果 由内标分子更好，但我发现其实很不容易将RNA的浓度以及内标 分子的表达量调整的完全一样）；体系的均一性等。
4、博凌科为生物科技-为你解质量好的RNAD260/D280在8-0之间，如果该值大于2，则认为RNA已经降解，最好不要再用了。
提取rna有哪些方法
酚氯仿法是一种经典的RNA提取方法。该方法利用酚和氯仿的抽提作用，通过反复抽提将蛋白质和其他杂质去除，从而得到较纯的RNA。虽然这种方法操作相对复杂，但其提取的RNA质量较高，适用于对RNA纯度要求较高的实验。 磁珠法提取RNA 磁珠法是一种新兴的RNA提取技术。
提取RNA的方法有以下几种： 匀浆处理法提取RNA 这种方法主要用于从细胞中提取RNA。它主要包括两个步骤：首先，使用高速组织捣碎机或匀浆器将细胞破碎，释放出其中的RNA。其次，通过离心等方法去除不溶性的细胞碎片和杂质，得到RNA溶液。这种方法简单易行，适用于大量样本的处理。
提取RNA的方法主要有以下几种： 机械破碎法。此方法通过机械破碎细胞结构来提取RNA。包括研磨、匀浆等步骤，可使细胞壁破裂，释放出RNA。 化学试剂提取法。这是一种常用的RNA提取方法。
酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb 甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
动物细胞rna抽提不需要除去基因组dna吗
需要去除基因组dna。动物细胞rna提取的实质就是将细胞裂解，释放出rna，并通过不同方式去除蛋白质、dna等杂质，最终获得高纯度rna产物的过程。
在进行 cDNA 的反转录前，需要去除全 RNA 中的基因组 DNA，以确保只有 cDNA 作为模板。这可以通过设计引物在内含子前后外显子上进行，避免基因组 DNA 的扩增。
直接加NaOH溶液与提取液混合搅拌，然后离心就可以了.因为RNA可溶于NaOH溶液，而DNA不可溶，离心后的上清液就不含有DNA了。RNA提取步骤： 匀浆处理：① 组织 将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml TRIzol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10%。
看你去哪一层了。分层后， RNA是在水相，而DNA是在中间的酚-氯仿层。“一般在加入溶解细胞剂，充分 溶解细胞后”这个方法是不可行的，这样的话，DNA酶都失活了。你提出RNA后，可以使用RNA miniprep试剂盒中的柱子，加样到柱子上。DNA酶的消化可以在柱子上进行。然后按照试剂盒的说明来做。
rna的提取方法有哪些
酚氯仿法是一种经典的RNA提取方法。该方法利用酚和氯仿的萃取原理，通过反复抽提将RNA从细胞或组织中提取出来。这种方法可以有效去除蛋白质等杂质，得到相对纯净的RNA。但操作相对复杂，需要一定的实验技巧。 酶消化法 酶消化法主要是利用蛋白酶K等酶来消化细胞或组织中的蛋白质，从而得到RNA。
提取RNA的方法有以下几种： 匀浆处理法提取RNA 这种方法主要用于从细胞中提取RNA。它主要包括两个步骤：首先，使用高速组织捣碎机或匀浆器将细胞破碎，释放出其中的RNA。其次，通过离心等方法去除不溶性的细胞碎片和杂质，得到RNA溶液。这种方法简单易行，适用于大量样本的处理。
提取RNA的方法主要有以下几种： 机械破碎法。此方法通过机械破碎细胞结构来提取RNA。包括研磨、匀浆等步骤，可使细胞壁破裂，释放出RNA。 化学试剂提取法。这是一种常用的RNA提取方法。
酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速离心后取上清，所得DNA大小为100-150kb 甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
酚氯仿法是一种经典的RNA提取方法。该方法利用酚和氯仿的抽提作用，通过反复抽提将蛋白质和其他杂质去除，从而得到较纯的RNA。虽然这种方法操作相对复杂，但其提取的RNA质量较高，适用于对RNA纯度要求较高的实验。 磁珠法提取RNA 磁珠法是一种新兴的RNA提取技术。
如何从冻存的细胞提取RNA十万火
1、将冻存管从液氮或冰箱中取出，无需等待细胞完全溶解，直接加入500至1毫升的Trizol，这将使Trizol在冻存管中结冰。接着，将冻存管缓慢融化，并使用加样器轻轻混合均匀。将细胞裂解液转移至Eppendorf管中，以16000g离心1分钟，吸出底部絮状沉淀。
2、RNA抽提 - 从冻存裂解细胞中取样，室温下充分溶解。- 加入氯仿进行两相分离，离心后，RNA位于水相上层，约为TRIZOL试剂的60%。- 将水相转移到无RNA酶离心管，加异丙醇沉淀RNA，4℃离心后，RNA形成胶状沉淀。 RNA处理 - 去除上清液，用75%乙醇清洗RNA沉淀，4℃离心。
3、b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。d. 细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
4、组织中提取总RNA： 将组织块迅速冷冻并研磨至粉末状，加入Trizol进行匀浆，确保无明显颗粒。样品转移至EP管并冷冻保存。细胞中提取总RNA： 分别处理贴壁和悬浮细胞，去除培养基，加入Trizol并充分匀浆。将收集的样品转移至RNase-free的离心管并冷冻保存。
5、样品 RNA 抽提步骤：首先取冻存细胞，室温溶解后进行两相分离，加入氯仿并手动剧烈振荡，4℃下离心，混合液体分为上下两层。其中，RNA 沉淀于水相中，通过异丙醇混合沉淀并离心以获得 RNA 沉淀，随后用 75%乙醇清洗，再于室温空气中干燥。最后，用无 RNA 酶的水溶解 RNA 沉淀，以备后续使用。
6、认为最好是按细胞冻存的方法4度30 min，-20度1 h，再转入-80度，提RNA时，直接放在37度水浴快速融解。放在冰上，可能会损失部分组织。核糖核酸（缩写为RNA，即Ribonucleic Acid），存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。
提取高质量的RNA!RNA提取实验操作步骤
1、匀浆处理：根据样本类型（如叶片、动物组织、单层培养细胞、细胞悬液或血液）选择不同的匀浆方法，确保快速且均匀地破坏细胞结构，以最大效率释放RNA。 在15-30℃下放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。 选择性步骤：在4℃下以10，000rpm离心10分钟，取上清液。
2、实验操作指南首先，确保组织在液氮中冷冻并研磨，然后根据样品量选择FreeZol（500μL裂解50mg组织）或TRIzol（均匀裂解）。悬浮细胞或贴壁细胞分别处理，前者离心后直接加入裂解剂，后者需清洗并用裂解剂吹打脱落。TRIzol法使用TRIzol裂解组织，加入氯仿后轻轻摇匀，静置4°C分层。
3、可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
4、可选步骤：4℃ 12，000 rpm（~13，400×g）离心10分钟，取上清。（一般我们提细胞或者大部分组织的RNA时不考虑这一步骤）注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。