细胞培养简单攻略-复苏/传代/冻存
安全防护：从液氮罐中拿出冻存管时要做好防护工作，需配备防冻手套和护目镜。水浴锅温度：严格控制在37℃，且解冻时冻存管管口切勿浸没到水中。复苏接种密度：一管细胞（1×10^6个）接种到1个T25（底面积25cm^2）中，摇匀后置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
在复苏细胞时，必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃。这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。细胞复苏操作过程 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中，并不断摇动，使其快速融化。
每支冻存管冻存1mL细胞悬液，并做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24小时后转入液氮罐储存，记录冻存管位置。温馨小贴士 为防止回收培养基时操作造成污染，运输用的培养基建议不再用来培养细胞，请换用新配制的完全培养基。收到细胞后第一次传代建议按1：2比例进行。
细胞冻存步骤：需冻存的细胞经过传代步骤后，用冻存液重悬，转移到冻存管中，放入冻存盒保存于-80℃冰箱，过夜后移入液氮。冻存液配制：通常为细胞培养液+30%血清+10% DMSO。DMSO是一种渗透性保护剂，能降低冰点，减少细胞内冰晶的形成，从而保护细胞。
冻存细胞建议尽快复苏一管培养检查，以免超出售后期。Tips：细胞收货出现漏液、培养瓶破损、干冰完全挥发等异常情况时，及时拍照联系销售人员。少量细胞脱落是正常状态，不影响细胞生长，按正常操作步骤继续培养即可。
细胞感染慢病毒48h后,细胞加嘌呤霉素48h后几乎没死细胞,但
第2天，按照MOI（一般1-100）添加慢病毒进行感染。第4天，慢病毒感染48h后，将细胞培养于含适当浓度嘌呤霉素的培养液中，筛选至少48h，此时对照组未转染的细胞应全部死亡，而感染病毒组细胞则为阳性细胞。
细胞感染病毒48小时后，荧光显微镜下观察荧光细胞比例。对24孔板细胞进行传代，根据细胞生长速度由一个孔分成3-5个孔，过夜培养。同时接种正常的未感染病毒的目的细胞作为对照。根据包装的慢病毒载体上的筛选抗生素（如嘌呤霉素）进行加压筛选。
将所需浓度的嘌呤霉素加入培养基，为筛选做好准备；高效筛选：在pac基因转染48小时后，将细胞转移至含有2微克/毫升终浓度的嘌呤霉素培养基；在传代时，循序渐进地提升浓度，逐步筛选出稳定的转导细胞；推荐从2到10微克/毫升的梯度进行；在筛选过程中，务必注意嘌呤霉素对实验的干扰，避免使用细胞进行实验。
观察细胞状态，每天更换含嘌呤霉素的培养基，记录细胞死亡情况（通常3-7天）。确定能够在3-5天内杀死大部分细胞的最低浓度（最低杀伤浓度）。药物筛选：将携带嘌呤霉素抗性基因的细胞（如转染载体或感染慢病毒后）接种到培养板中。待细胞贴壁或进行转染后24-48小时，开始用确定的嘌呤霉素浓度筛选。
保姆级别用氯化钙制备感受态细胞教程(亲测有效)
倒出培养液，将管倒置1min，使最后残留的培养液流尽。最终重悬与冻存 每50mL初始培养物用3mL用冰预冷的0.1mo/L CaCl重悬细胞沉淀。将重悬后的细胞分装至5mL EP管中，每管加入100μL 0.1mo/L CaCl混悬液和50μL 50%甘油，吹打混匀。
实验原理 氯化钙法制备感受态细胞的原理是利用细菌在0℃、低渗的氯化钙溶液中膨胀成球形，此时DNA形成抗DNase的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面。经过42℃短时间热冲击处理，细胞吸收DNA复合物。
在无菌环境下，将细菌转移到预冷的50ml聚丙烯管中，在冰上放置10分钟。随后，于4℃以4000转/分离心10分钟，回收细胞。去除上清液，用冰预冷的0.1mol/L CaCl2重悬细胞沉淀，置于冰浴中。此过程方便快捷，对于大多数大肠杆菌菌株（MC1061除外），采用TFB代替氯化钙效果相似。
化学实验中的重悬是什么意思
1、在化学实验中，重悬是一项重要操作，它的含义是“重新悬浮”。具体来说，就是使用适当的缓冲液或培养液来将通过离心、沉降等方法得到的固体（例如沉淀、细胞、活性物质等）重新悬浮。
2、重悬就是“重新悬浮”，具体操作是用适当的缓冲液或培养液将离心或沉降等方法得到的固体（沉淀、细胞、活性物质等等）重新悬浮。
3、重悬：使用过程中，应控制颗粒的单分散性和均匀悬浮液，以提供稳健且可重复的性能。如颗粒沉降，需重新悬浮。超声重悬颗粒可逆转由偶联反应诱导的轻度聚集。灭菌：SP3-Carboxyl磁珠不是无菌的，但含有叠氮化钠（0.05%）作为防腐剂。建议在长期储存后评估细菌污染。
牛肉买回来就冷冻了、之后拿出了化了好多血水正常吗?
1、一般来说，如果牛肉在解冻后只是有少量血水渗出，且肉质看起来正常，没有异味、变色等情况，通常是正常的。但要是血水过多，或者牛肉伴有异味、肉质软烂等状况，那就可能表示牛肉在储存或运输过程中存在问题，比如储存温度不稳定等，这种情况下的牛肉品质可能较差，不太建议食用。
2、冷冻肉解冻后出血水多可能是正常现象。一方面，冷冻过程中，肉中的细胞结构会受到一定破坏。当解冻时，细胞内的一些液体成分就容易渗出形成血水。比如猪肉，在冷冻时细胞间隙中的水分会结成冰晶，冰晶的形成可能会对细胞造成机械损伤，解冻后细胞内的血水就会流出来。
3、冷冻肉解冻后出血水是比较常见的现象。当冷冻肉解冻时，细胞结构会受到一定破坏。在冷冻过程中，细胞内的水分形成冰晶，体积膨胀，导致细胞破裂。解冻后，细胞内的一些物质包括血水就会流出。而且冷冻肉在储存过程中，其肌肉纤维等组织也会发生一定变化，解冻时也可能促使血水渗出。
4、正常的，在宰杀的时候血水浸入了肉中这是正常的，回来没有冲洗好也没关系，在吃前从冰箱拿出来，浸入凉水中40分钟，冲洗赶紧后换水再浸泡10分钟就可以了。
5、牛肉在解冻过程中出现大量透亮红水，这通常表明肉品可能存在问题。正常情况下，牛肉解冻只会有一定的水分释放，但不会出现大量的红色液体。 一斤（500克）牛肉在解冻后不可能无故损失超过一半的重量。通常，牛肉含水量大约在75%-78%，但这并不意味着解冻时会失去这么多水分。
6、牛肉中血水多的原因主要有以下几点：牛肉中的血水凝固析出：在烹饪过程中，尤其是煮牛肉时，随着水温的升高，牛肉中的血水会凝固并析出，形成血沫。这是牛肉中血水多的一个直观表现。
一个人被瞬间冰到零下270度,他真的死了吗?
在零下270度的低温下，人体细胞会被瞬间冻结，导致生命活动停止。这种情况下，人体内的水会结冰，破坏细胞结构，导致人体死亡。 绝对零度是理论上的最低温度，在这个温度下，所有原子运动都会停止。目前的技术无法达到绝对零度，但可以无限接近。在绝对零度下，任何生命体都会死亡。
在零下270度的低温下，人体细胞会被瞬间冻结，导致生命活动停止。这种情况下，人体内的水会结冰，破坏细胞结构，导致细胞死亡。因此，如果一个人被瞬间冰冻到零下270度，他将会死亡。 2005年在俄罗斯北极圈附近发现的一头完整而僵硬的猛犸象，其嘴里残留着待咽的毛莨草，眼睛至今透明。
一个人被瞬间冰到零下270度，他当然当时还是不会死的！但是，让他从冬眠中苏醒，难度很大。很有可能使他死亡！ 首先，人被冷冻以后，的确可以使人的器官处于类似动物冬眠的状态，从而保持冷冻前的状态。
在零下270度的极端条件下，人类无法存活。人体的温度降至0度以下时，多数生物化学反应将停止进行。血液循环会因为血液凝固而中断，体内细胞活动也将停止。以下是详细的解释： 生物化学反应的停止：人体内的许多生化反应需要特定的温度范围才能进行。
一个人被瞬间冰到零下270度的话，我认为完全不能活，人体的温度当达到0度以下时，很多地方都已经成冰了，所以化学反应根本没办法进行，其次如果是在短期内达到，体内的温度并没有下降很多，倒是问题不大，接下来跟大家具体说明。人体在0度以下，化学反应很多已经停止。