流式检测中同型对照与二抗及封闭剂的区别?
1、在流式细胞检测中，了解同型对照、一抗（或二抗）与封闭剂之间的区别至关重要。首先，需理解同型抗体的定义。同型抗体指的是与一抗（或二抗）同种属、相同亚型、相同剂量、相同免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，但其可变区或fab段不同，其他区域相同。
2、同型对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。
3、在流式细胞实验中，推荐使用与二抗种属来源一致的标准血清（5% v/v）作为封闭剂，以减少非特异性反应。在Western Blotting实验中，牛血清蛋白（BSA）需谨慎使用，因其可能含有牛IgG，导致非特异性反应。
4、阴性对照，没有加任何抗体的细胞悬液。加了同型非特异性一抗，又加了荧光标记二抗的细胞悬液 只加有荧光标记二抗的细胞悬液。然后才是你的检测样本，加了特异性一抗和荧光标记二抗的细胞悬液。
5、否则你用抗两种不同蛋白的单克隆抗体，加上FITC标记的抗鼠二抗，你在流式上什么都分不出来。而且，考虑到每次抗体染色都会存在非特异性的染色（这也就是要求同型阴性对照的原因），你用抗体标记的次数越少越好。
6、封闭是免疫检测中的一个关键步骤，其目的是防止抗体非特异性地与膜结合。选择合适的封闭剂，如牛血清白蛋白（BSA）、脱脂牛奶或Blocking试剂，并确保其与膜的亲和力高于抗体，同时不会掩盖目标蛋白。抗体的选择和使用对检测结果有直接影响。
简述流式细胞免疫分析仪免疫检测的质量控制。
光路与流路校正：主要目的在于确保激光光路与样品流处于正交状态，使仪器检测时的变异减少到最小，从而控制仪器的CV值，校正物为Flow-checkFluoropheres。
作为一种高效、快速且准确的细胞分析方法，流式细胞仪检测可以在短时间内对细胞进行定量和定性分析。它被广泛应用于医学、生物学、免疫学和遗传学等领域，为这些领域的研究提供了强有力的支持。在医学领域，流式细胞仪检测可以用于血液分析、肿瘤标志物检测和免疫细胞计数等。
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流式细胞术中的同型对照怎么设置
1、流式的isotype 对照（同型对照），就是使用相同标记，相同亚型的非特异性抗体，在另外一个管子的样本，采用同样的染色步骤染色。比如，你使用了小鼠IgG1， PE 标记的特异性抗体，那就选用小鼠IgG1， PE标记的非特异性抗体。
2、在设计流式实验时，应根据具体情况决定是否需要使用同型对照。对于阴阳性分群明显的指标，如CDCDCD8等用于T细胞的检测指标，通常不需要同型对照即可准确圈出阳性细胞群。
3、在实验设计中，选择恰当的对照至关重要。同型对照通过同型抗体实验消除抗体非特异性结合；阴性细胞对照用于排除抗体的非特异性荧光；二抗对照用于减少二抗非特异性荧光；阳性对照确保实验不受方法、试剂等因素影响；空白对照则用于测定基础荧光信号。
4、内部对照：用于实验设计对比，如刺激前后、加药处理前后、共培养前后等，确保实验结果的准确性。 生物学对照：用于比较已知阴性或阳性的样本，确保结果的正确性，特别是在细胞内染色实验中，需要考虑背景荧光的差异。通过这些对照的合理设置，流式细胞术实验能够获得更精准、可靠的结果。
5、一些同学认为，只需简单检测细胞凋亡，无需设置空白对照和单染对照，仅依据未处理组即可。但这种做法并不被推荐。对照设置的充分与否，直接影响实验结果的质量与准确性。对照在实验中不可或缺。在流式细胞术中，对照能将实验结果与背景区分开，排除非特异性效应，确保数据质量。
6、在进行流式细胞术实验时，无论是检测活细胞还是死细胞，都必须设立空白对照和同型对照。这是因为在流式检测中，我们评估的是相对荧光强度，而空白对照能够帮助我们设定阴性阈值，从而更准确地判断细胞的荧光信号是由于特定标志物的存在还是背景荧光的干扰。
关于细胞流式的同型对照的问题
1、同型对照主要应用于阳性与阴性之间没有明确分界线的情况，如果阳性细胞群非常明确，就无需使用同型对照。在进行多色荧光染色时，通常不采用同型对照，而是采用FMO（荧光素减一）对照，这是一种更为精确的方法。尽管同型对照被广泛使用，但也存在一些反对意见。
2、同 型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型 对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。
3、流式的isotype 对照（同型对照），就是使用相同标记，相同亚型的非特异性抗体，在另外一个管子的样本，采用同样的染色步骤染色。比如，你使用了小鼠IgG1， PE 标记的特异性抗体，那就选用小鼠IgG1， PE标记的非特异性抗体。
流式细胞术中为什么要用同型对照?如何选择同型对照?
同 型对照是使用与一抗相同种属来源、相同亚型、相同剂量和相同的免疫球蛋白及亚型的免疫球蛋白，用于消除由于抗体非特异性与细胞结合而产生的背景染色。同型 对照是真正意思上的阴性对照，它不但可以用来设定流式细胞仪的电压，而且还可以帮忙省去昂贵与繁琐的重组细胞因子竞争封闭步骤。
在进行流式细胞术实验时，无论是检测活细胞还是死细胞，都必须设立空白对照和同型对照。这是因为在流式检测中，我们评估的是相对荧光强度，而空白对照能够帮助我们设定阴性阈值，从而更准确地判断细胞的荧光信号是由于特定标志物的存在还是背景荧光的干扰。
在流式实验中，仅仅参考空白对照可能无法准确圈门，进而导致假阳性结果。通过使用同型对照来区分阴阳性，可以有效排除非特异性结合造成的背景染色，提高实验结果的准确性。以CD45+白细胞样本为例，未进行染色和Fc受体阻断的空白样本，各通道荧光处于低水平。通过染同型对照，背景荧光显著增强。
【罗工流式宝典第8式】流式中八大常见对照的作用
死活对照：用于检测样品中死细胞的影响，减少死细胞的自发荧光和非特异性结合，避免假阳性结果。活性染料如PI、7-AAD或FVS系列染料用于鉴定死细胞。 FMO对照：在没有其他非特异性染色的情况下，用于设置圈门，主要背景信号来自补偿泄漏而非非特异性结合。
实验过程中需注意对照设置，包括未培养但染色的对照细胞和培养但未染色的对照细胞，用于确认细胞的初始标记亮度和阴性信号及细胞的自发荧光。在细胞培养过程中，外界因素可能导致细胞生长状态下降，结合染死活染料排除死细胞干扰。
流式细胞仪的校准流式细胞仪的校准包括流路的稳定性、光路的稳定性、多色标记荧光颜色补偿、光电倍增管转换的线性和稳定性。对仪器的校准主要是利用标准微球进行监测。聚苯乙烯可以被做成各种大小的微球，也可被荧光标记或者拥有定量免疫球蛋白的结合位点。