PE在流式中是什么

1、R-藻红蛋白(也称为 PE 或 R-PE)在实验室中可用作基于荧光的指示剂,用于指示蓝藻的存在和标记抗体,最常用于流式细胞术。它还用于微阵列分析、ELISA 和其他需要高灵敏度但不具有光稳定性的应用。由于其快速光漂白,其在免疫荧光显微镜中的使用受到限制特征。

2、PE在流式细胞仪中一般指的是phycoerythrin, 这是一种发橙色偏红的荧光色,缩写为PE。用来检测该范围信号的通道可以叫做PE通道。

3、在流式免疫技术中,最常用的染料有异硫氰酸荧光素(FITC)和藻红蛋白类(PE)、罗丹明。FITC是免疫荧光标记最常用的荧光探针,可产生亮绿色荧光。德州红是罗丹明的衍生物,产生红色荧光。藻胆蛋白类多发生橙色至红色荧光。

4、荧光强度方面,PE通常最强,随后是APC、FITC和PerCP。在多色流式实验中,荧光素的选择需考虑机器配置、抗原表达强度以及光谱重叠。例如,BD Calibour流式仪可能需要根据激光和通道选择特定荧光素。荧光素的搭配需遵循每个通道单一荧光素原则,且尽量避免光谱重叠,如选择FITC/PE-Cy7或FITC/APC来减少干扰。

5、PE是从红藻中分离纯化获得的一种常见染料,经激光激发后发出橙黄色荧光,zui大发射波长为575 nm。PE具有吸光性能好和光量子产率高的特点,可用于标记表达水平较低的蛋白。在流式细胞术检测中,PE标记的抗体适用于所有配备488 nm氩离子激光器的流式细胞仪。

流式——多色流式实验荧光素的选择

在多色流式实验中,荧光素的选择需考虑机器配置、抗原表达强度以及光谱重叠。例如,BD Calibour流式仪可能需要根据激光和通道选择特定荧光素。荧光素的搭配需遵循每个通道单一荧光素原则,且尽量避免光谱重叠,如选择FITC/PE-Cy7或FITC/APC来减少干扰。偶联荧光染料需注意其稳定性,曝光时间不宜过长。

多色流式实验必须遵循几个原则:荧光素的选择:根据抗原表达水平,抗原表达越强的,抗体所标记的荧光素亮度就越弱。抗体浓度的滴定。

不存在荧光重叠的两个抗体不需要调节补偿。样本为PBMC,想用三色标记Treg细胞,分别为CD4-PECY,CD25-Fitc,Foxp3-PE,想知道如何设置荧光补偿,用的是BD的流式仪,是设置阴性管一个,单阳性管每种一个,样品管一个么?荧光素强度依次为PE, PECY5 APC FITC, PE最强,FITC最弱。

流式PI的横坐标为什么是PE

1、横坐标代表的是PE的荧光强度。每个细胞在通过激光束的时候,机器会记录一个信号。这个信号可以用一个曲线来标示。曲线的高度H,代表了最高的强度,曲线的宽度W,代表了通过的时间(细胞的大小),曲线下面积A,是这个信号的综合体现。PE-A,就是把每个信号的曲线下面积(A)记录作图得到的。

2、流式细胞仪的数据取决于在记录的时候设置了多少个信道。在显示散点图的时候,不管有多少个信道,一次只能是最多两种信号。至于横坐标是什么,纵坐标是什么,完全是根据想要看的指标和个人习惯,没有什么限制。是是否是FITC或者PE无关。

3、PE在流式细胞仪中一般指的是phycoerythrin, 这是一种发橙色偏红的荧光色,缩写为PE。用来检测该范围信号的通道可以叫做PE通道。

4、如果纵坐标是FITC, 横坐标是PE。调节电压后,阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标(PE)和纵坐标(FITC)的平均荧光强度值。电压调好以后,上单色阳性样本。

5、FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中,而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。

6、单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出;鞘液由鞘液管从四周流向喷孔,包围在样品外周后从喷嘴射出。为了保证液流是稳液,一般限制液流速度υ10m/s。由于鞘液的作用,被检测细胞被限制在液流的轴线上。流动室上装有压电晶体,受到振荡信号可发生振动。

流式细胞术怎么调节荧光补偿FITC/PE/PerCP/APC

在纯手工的年代,你需要画出这四个颜色两两配对的散点图,比如FITC-PE,FITC-PerCP,FITC-APC,PE-PerCP,PE-APC,PerCP-APC,这一共6个散点图。然后,先上未染色的样本,调节各个荧光通道的电压,是细胞都位于各个散点图的左下角。

在纯手工的年代,你需要画出这四个颜色两两配对的散点图,比如FITC-PE, FITC-PerCP, FITC-APC, PE-PerCP,PE-APC, PerCP-APC,这一共6个散点图。然后,先上未染色的样本,调节各个荧光通道的电压,是细胞都位于各个散点图的左下角。

为减少荧光泄露影响,我们需在流式细胞仪上设置补偿。补偿是人为校正,移除不应出现的阳性信号,还原实验结果。例如,通过单染FITC样本作为补偿对照,调整后即可消除PE通道的信号。若仪器补偿调节不准确或未进行补偿,我们可在个人电脑上使用FlowJo软件进一步调节。FlowJo提供两种补偿调节方法。

荧光素的搭配需遵循每个通道单一荧光素原则,且尽量避免光谱重叠,如选择FITC/PE-Cy7或FITC/APC来减少干扰。偶联荧光染料需注意其稳定性,曝光时间不宜过长。总的来说,合理选择和使用荧光素是提高流式细胞实验准确性和效率的关键,包括考虑机器特性和样本的特性,以及通过单标对照进行补偿调节。

如果目标Marker较少, 比如三色、四色等,应尽量选择单体染料(例如:FITC、PE、APC等)。 如果 检测Marker较多, 或者流式细胞仪激光器受限,串联染料(PE/CyaninePerCP/Cyanine5等)的使用,是非常有必要的。大部分串联染料,在光照或者实验操作有“固定”步骤时,容易出现降解。

以Calibur为例说明,Calibur的FL1通道选择了FITC就不能选择AlexaFluro488,或者选择了Alexa Fluro488就不能选FITC Calibur的FL3通道尽管能检测PE-Texas Red, PE-Cy5, PerCP, PerCP-Cy5, PE-Cy7五个荧光素,但是我们我们搭配的时候只能选择其中1个。

流式细胞仪中最常用于单克隆抗体标记的荧光染料是

最常用的染料有FITC、PE、ECD或PeCy5。本题正确答案是E。

荧光素是具有光致荧光特性的染料,荧光染料种类很多。荧光素也就是fda。fda可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较bcecf或calcein的亲水性低,因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。fda也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488nm和530nm。

白血病的诊断和治疗:FCM采用各种抗血细胞表面分化抗原(CD)的单克隆抗体,借助于各种荧光染料(异硫氰基荧光素FITC,藻红蛋白PE等)测定一个细胞的多种参数,以正确地判断出该细胞的属性。各种血细胞系统都具有其独特的抗原,当形态学检查难以区别时,免疫表型参数对各种急性白血病的诊断和鉴别诊断有决定性作用[6]。

GoldView染料:GoldView(GV)是一种新型核酸染料,可替代EB,其灵敏度与EB相当,使用方法与之完全相同。在紫外透射光下,双链DNA呈现绿色荧光,也可用于RNA染色。实际上,Goldview就是吖啶橙,也被称为AO。传统的细胞凋亡试验采用的染料正是吖啶橙,即AO/EB染色试验。

定义:MitoTracker Red CMXRos 是一种红色荧光染料,用于对活细胞线粒体进行染色,并且该染料的积累取决于膜电位。乙醛固定后,该染料可稳定保存。荧光染料常用于荧光染料产品的制备,以及增白洗衣粉中的增白剂,指示信号用的各种荧光路标漆,荧光标志服等。

流式细胞技术PE
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