您关心的流式细胞术检测细胞凋亡(FITC-PI),来了!
1、为进行细胞凋亡的FITC-PI检测，首先收集要用于细胞凋亡检测的细胞，离心并去除培养基。然后，用PBS洗涤细胞一次，重悬于1×Binding Buffer中。对于对照组，使用400μL的1×Binding Buffer，其他处理组则使用100μL的1×Binding Buffer。
2、流式Annexin-FITC /PI双染法是一种常用的检测细胞凋亡的方法。在流式细胞术中，通过Annexin-FITC和PI对细胞进行染色，可以将细胞分为几个不同的象限，每个象限代表了细胞的不同状态。左下象限通常表示的是正常状态的细胞，这些细胞既不表达Annexin-FITC也不表达PI，表明它们没有经历凋亡过程。
3、流式检测细胞凋亡的原理 Annexin V和PI双染法是经典的细胞凋亡检测方法，基于凋亡早期细胞膜上磷脂酰丝氨酸（PS）从内侧翻转到表面这一原理。Annexin V-FITC标记有助于识别早期凋亡细胞，而PI-DNA复合物可用于检测所有阶段的细胞死亡。
4、annexin FITC/PI 双染试剂盒在染色时确实需要使用专门的buffer来稀释染色试剂，而不是直接使用PBS。因此，在进行染色之前，应当先对PBS进行离心处理，去除其中的杂质，然后再加入用buffer稀释的染色试剂，随后进行上机检测。
tunel试剂盒细胞与组织切片的有区别吗
TUNEL试剂盒是用于检测细胞和组织切片中的DNA断裂，从而标记凋亡细胞的一种方法。这种技术特别适用于组织样本中的细胞凋亡研究，并且是目前在细胞和组织内研究细胞凋亡最广泛采用的技术之一。TUNEL技术的优势在于它能够原位标记DNA断裂端，从而标记凋亡细胞。
TUNEL测试法的主要特征包括验证用于固定细胞和固定组织切片中的凋亡检测，通过减少孵化步骤的数量最大限度地减少手动操作，与其他荧光蛋白和共轭的兼容性，以及为25次试验提供了足够的试剂。
在人肺腺瘤癌切片中，使用细胞计组细胞和组织TINL细胞凋亡测定试剂盒进行绿色荧光法测定。DNA链断裂在经DNA酶处理的组织切片上显示出强烈的荧光染色，细胞核染色为核蓝色。
细胞凋亡的检测方法——TUNEL法，通过识别并标记DNA断裂的3-OH末端，展现出其在体外细胞和组织切片中高灵敏度的优势。这种方法首先利用TdT酶和标记的dUTP来标记DNA片段，随后通过HRP标记的链霉卵白与标记的dNTP结合，产生颜色反应，凋亡细胞会显示出增强的荧光。
求细胞凋亡的一些系统的检测方法,最好全!谢了!
1、线粒体膜电位的改变可通过JC-1染料检测，活化的caspase-3检测则需通过特异性抗体标记，DNA片段化检测则利用FITC标记的DUTP或BrdU掺入到DNA缺口，通过检测信号强度判断片段化程度。每种方法都有其特点和适用场景，选择合适的检测方法，可以更准确地评估细胞凋亡过程，为疾病研究和治疗提供重要依据。
2、细胞凋亡检测实验方法与步骤涉及PI单染色法、Heochst 33342/PI双染色法以及Annexin V/PI双染色法，以下详细阐述各方法的步骤与结果判断。PI单染色法**： **细胞收集**：获取约（1~5）×106个/mL的细胞，通过离心去除培养液。 **洗涤**：使用PBS洗涤细胞一次，离心去除PBS。
3、经过人们多年的研究发现，应用原位末端转移酶标记技术（TDT assay or TUNEL reaction）来检测细胞凋亡，其灵敏度高，特异性强，能早期显示未发生典型变化的凋亡细胞。它是检测单个细胞早期出现凋亡现象的好方法。
4、细胞凋亡的检测细胞凋亡与坏死是两种完全不同的细胞凋亡形式，根据死亡细胞在形态学、生物化学和分子生物学上的差别，可以将二者区别开来。细胞凋亡的检测方法有很多，下面介绍几种常用的测定方法。 细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。
5、细胞核形态染色则相对简单，仅需荧光染料配合普通荧光显微镜即可。Hoechst 33342是最常用的染料，可自由穿透细胞膜，直接对核染色。核形态染色是一个定量指标，但在实验中需手动计数多个视野的不同核形态。接着，基于细胞功能的方法。线粒体膜电位检测是评估细胞凋亡的常见手段，其中JC-1染料常被用到。
细胞主动性死亡--凋亡的检测方法
1、形态学检测通过光学显微镜观察细胞形态，Hoechst染色是常用的方法。正常细胞核在Hoechst染色后呈现蓝色，而凋亡细胞的细胞核则会密集染色，近乎白色。具体步骤包括：细胞固定、染色、洗涤并使用荧光显微镜观察。以碧云天公司的Hoechst染色试剂盒为例，操作涉及贴壁细胞、悬浮细胞和组织切片的处理过程。
2、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有出芽现象。丫啶橙染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。
3、Annexin V和PI双染法是流式检测细胞凋亡的经典方法 ，它是基于凋亡的早期细胞膜上的磷脂酰丝氨酸（phosphotidylserine， PS）从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面这一原理来实现的（如下图3）。
法医常用的DNA检测试剂盒及其原理
1、在细胞凋亡过程中，核酸内切酶被激活，选择性地降解染色质DNA，产生大约50-300 kb的大片段，并在核小体连接处进一步断裂成约180-200 bp或其整数倍的DNA片段。这些片段可以通过凯基细胞凋亡DNA Ladder检测试剂盒提取，并通过琼脂糖凝胶电泳及溴化乙啶染色呈现为梯状条带，从而判断细胞是否发生了凋亡。
2、首先，其裂解液/蛋白酶K能高效地裂解细胞并立即灭活核酸酶，使得DNA能选择性地吸附在磁珠上。这一过程通过快速的漂洗-分离步骤进行，使用抑制物去除液和漂洗液，能有效地去除细胞代谢物、蛋白质等杂质。
3、酚-氯仿方法是经典且常用的核酸提取技术，它利用核酸与蛋白质等杂质在水相和有机相中的溶解度差异进行分离。这种方法操作简便，提纯效率和纯度都较高，但存在耗时长、有毒性试剂使用的缺点，因此在实验室中应用较少。
4、酚－氯仿方法是提取核酸的经典方法，主要原理是利用核酸、蛋白等杂质在水相和有机相中溶解度不同而重新分配。试剂盒原理是在特定溶液环境下（高盐、低pH）使核酸吸附在固相介质（一般是硅胶膜）上，洗涤去除杂质后，再改变溶液环境使DNA溶解到纯水或TE中。
5、磁珠法提取DNA试剂盒是纳米技术、分子生物学技术、生物医学技术和法医学技术的综合高科技产品。
6、独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞并灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA选择性吸附于磁珠，再通过一系列快速的漂洗-分离的步骤，抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后用双蒸水即可将纯净基因组DNA从磁珠上洗脱。
【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果该怎样分析
在进行流式细胞仪检测细胞凋亡时，我遇到了一些困惑。我使用的是AnnexinV-FITC凋亡试剂盒，采用AnnexinV/PI双染方法检测细胞凋亡。然而，当我得到凋亡散点图后，发现关于1，2，4象限代表的细胞类型说法不一。
手里的资料说法都不相同。试剂盒说明书：1代表细胞收集过程中机械性损伤的细胞，2 代表继发性坏死细胞，4代表凋亡细胞。有资料说：1代表坏死细胞，2代表晚期凋亡细胞，4代表早期凋亡细胞。我就不明白了，既然是凋亡，就算是晚期，细胞膜也会破坏？还有的认为，2象限代表晚期凋亡和继发性坏死的细胞。
细胞碎片较多：碎片增多可能源于细胞固定或渗透性处理不当，影响实验准确性。调整固定时间与渗透条件，确保细胞结构完整。0正常组阳性率异常：正常组阳性率过高可能由背景荧光过高、染色剂浓度不适当或样本处理不当引起。调整染色剂浓度，控制样本处理过程，减少背景干扰。
进行流式检测细胞凋亡时，首先需要收集细胞样本并制备细胞悬液。然后，进行Annexin V-FITC和PI的双染色，根据荧光信号在流式细胞仪上的分布情况，识别和区分不同状态的细胞。数据分析 流式细胞仪收集的数据通过专门的软件进行分析，生成双色散点图，直观显示细胞在不同状态下的分布。
一般都是计数一个固定值，比如10000，然后得到每个GATE里面的比率。对比比率。每组多做几个样本。组间比例对比可以用T test。
需要在散点图上先画出4个象限，位置根据无染色的阴性细胞先定出左下象限。Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。