「科研干货」了解凝胶色谱仪(GPC)从这里开始,快来GET吧!
1、凝胶色谱法（Gel Permeation Chromatography，GPC），又名体积排除色谱（Size Exclusion Chromatography，SEC）、凝胶过滤色谱（GelFiltration Chromatography，GFC），是液相色谱的一个分支，是高聚物表征的重要方法之一。它于1964年由J.C.Moore首先研究成功。
2、直观介绍：凝胶渗透色谱仪（GPC）是用于测量聚合物分子量的重要设备，包括PL-GPC50、PL-GPC220和Waters GPC 1515等型号。仪器工作原理基于分子大小与通过多孔色谱柱速度的不同，大分子移动更快，小分子移动较慢，从而实现分子量分离。测试周期通常为5-7个工作日。
3、了解凝胶色谱仪（GPC）的工作原理对于进行有效的样品分析至关重要。当通过铄思百检测平台进行GPC测试时，该技术主要基于分子的流体力学体积差异进行分离。当样品通过多孔性凝胶色谱柱时，大分子由于不能完全填充孔道，会首先流出，形成色谱峰，而小分子则能深入孔洞，滞留时间较长，最后流出。
凝胶色谱法分离蛋白质原理
原理：凝胶色谱法是一种在生物化学和蛋白质化学中广泛应用的分离技术。这种方法主要是基于蛋白质分子的尺寸和形状，通过凝胶内部的孔隙进行分离。凝胶色谱法的核心在于凝胶介质的选择和使用。当蛋白质混合物通过凝胶时，不同大小的蛋白质分子会以不同的速度通过凝胶的孔隙。
凝胶色谱法是一种有效的蛋白质分离技术，其核心原理基于分子尺寸差异。大分子蛋白质由于其直径较大，无法轻易地进入凝胶颗粒的微小孔隙，因此在洗脱过程中，它们会相对较快地向下移动，最先流出色谱柱。相比之下，小分子物质则有所不同。
凝胶色谱法分离蛋白质的原理：由于蛋白质的形状、大小、吸附性质、亲和力等性质都有差别，所以不同分子量的蛋白质通过多孔凝胶颗粒的间隙的流动速度不同、路程长短也不同；分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙的路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部的路程长，流动慢。
相对分子分离蛋白质。凝胶色谱法的原理是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法，实际上就是微小的多孔球体，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶的内部通道，路程较长，移动速度较快。
凝胶色谱，又称为分子排阻色谱，其分离物质的原理为分子筛原理，且多用于分离有机大分子化合物，如蛋白质、多肽、多糖等.对高分子物质有很高的分离效果。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。
凝胶色谱法是一种用于分离和分析生物大分子，如蛋白质和多糖的色谱技术。凝胶色谱法的基本原理是利用凝胶介质的多孔性对分子大小不同的物质进行分离。在凝胶色谱中，凝胶介质被用作固定相，而待分离的样品溶液则作为流动相通过凝胶柱。
凝胶色谱法凝胶种类及性质
聚丙烯酰胺凝胶是一种由丙烯酰胺交联而成的人工合成凝胶，通过控制交联剂的用量，可以制成不同型号。交联剂越多，凝胶的孔隙越小，如日本Tosoh的TSKGEL pw系列的Bio-Gel P，专为蛋白和多糖的纯化设计。另一种常见的凝胶是交联葡聚糖，商品名为Sephadex，其型号以G开头，数字代表凝胶得水值。
凝胶色谱法是一种用于分离和分析生物大分子，如蛋白质和多糖的色谱技术。凝胶色谱法的基本原理是利用凝胶介质的多孔性对分子大小不同的物质进行分离。在凝胶色谱中，凝胶介质被用作固定相，而待分离的样品溶液则作为流动相通过凝胶柱。
交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。
【干货】凝胶色谱使用的注意事项
色谱柱存放时，短期应使用蒸馏水冲洗并密封保存，长期存放则需使用特定溶剂充满或防腐剂冲洗，同时注意避免低温或高温环境。维护色谱柱时，避免高温使用与高压冲洗，做好仪器维护记录。
载体是GPC产生分离作用的关键，对载体的要求包括良好的化学稳定性和热稳定性、有一定的机械强度、不易变形、流动阻力小、对试样没有吸附作用等。GPC载体的种类包括交联聚苯乙烯凝胶、多孔性玻璃、聚乙酸乙烯酯凝胶及聚丙烯酰胺凝胶、木质素凝胶等。评价色谱柱性能的两个重要参数是柱效率N和分离度R。
GPC系统平衡的艺术：从柱子安装到平衡操作，每一个步骤都需要精确执行，如用流动相冲洗、平衡检测器，确保数据的准确性和稳定性。
固定化酵母细胞时，酵母细胞的活化用蒸馏水；配制海藻酸钠溶液时，加热要用小火，或者间断加热；要将海藻酸钠溶液冷却至室温，再加入活化的酵母细胞。CaCl2溶液有利于凝胶珠形成稳定的结构。 提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
IEC所用色谱填料——离子交换剂，通常为人工合成的多聚物，包括基质、电荷基团和反离子三部分。基质多采用琼脂糖或葡聚糖凝胶，通过酯化、醚化或氧化等化学反应引入电荷基团，能与带相反电荷的化学物质进行交换吸附。离子交换剂在水中呈不溶解状态，能释放反离子，与溶液中的其他离子或离子化合物结合吸附。
通过溶解度差异，高聚物相分离通过温度调整或沉淀剂的加入得以实现。凝胶渗透色谱法（GPC）以分子流体力学体积为标准，分离出分子大小各异的高分子，展示了分子量对聚合物性能的深远影响。