请教:用蛋白酶K消化组织提取DNA,灭活后是否需
1、我提组织DNA的时候，是一起加上去，再消化过夜的，即 l mol/L Tris-Cl （pH 0） + 0.5 mol/L EDTA （pH 0）+ 2 mol/L NaCl + 10% SDS+ 100 g/ mL 蛋白酶K。而提血样的时候，我先加消化液 37度水浴 1h，然后加了蛋白酶K，消化6-7h。
2、实验步骤包括准备所需的仪器、材料与试剂，确保所有试剂均高压灭菌。蛋白酶 K 需要配制为 10mg/mL 的浓度，并使用一次性过滤器过滤后保存。此外，使用特定配方的酶解液和缓冲液进行细胞裂解和 DNA 提取。在操作过程中，需注意避免 DNA 酶的污染，动作应轻柔以减少 DNA 机械损伤。
3、DNA的提取方法 酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb 甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
4、提取DNA的实验步骤通常包括以下环节： 样品准备：选择适当的生物样本，如血液、细胞、组织等。确保样本新鲜，避免DNA降解。 细胞裂解：通过物理或化学方法破碎细胞，释放DNA。常用的裂解方法有研磨、超声波破碎或使用裂解液。
5、DNA提取（粗提取）酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb 甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
6、基因组DNA特点：因为大，所以在提取中常常会有降解造成拖带。此外基因组很大，一般不用电泳方法判断。你的结果中，6 按顺序都可看到基因组DNA（最上边的——其实是smear 很宽的）。 1-2泳道基因组DNA也有 但不如8 道。
求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤
1、总RNA提取步骤繁琐而重要，适用于多种生物样本。
2、弃收集管中的离心液，再于滤柱中加入500μL Wash Buffer RPE液，13000~14000rpm，离心2min。将滤柱移到一个干净的5mL eppendorf管上，向滤柱中加入30~50μL的Rnase-free Water，室温静置1~3min。12000rpm，离心1min，收集离心液即为提取的病毒RNA，立即做实验或-20℃以下保存。
3、求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤 样品处理：a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml 裂解液。
4、RNA抽取一般使用Trizol法抽提：Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。Trizol作用原理：在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。
protocol:提取RNA,逆转录和RT-qPCR
反转录PCR是指以mRNA为模板，在反转录酶的作用下合成cDNA。通常使用禽成髓细胞性白血病病毒或莫洛尼鼠白血病病毒的反转录酶。在20μl体系中，加入Oligo（dT）、dNTP、逆转录酶、RNase抑制剂和buffer，进行反转录。（4）RT-qPCR：提取总RNA，使用Oligo（dT）结合mRNA进行反转录，生成cDNA。
rt-qpcr全称为实时荧光定量（Real Time Quantitative）RT-qPCR属于第二代PCR技术，与常规的PCR技术相比，RT-qPCR技术可对DNA起始模板进行定量，同时可以对整个扩增反应进行实时监控。
实时荧光定量PCR（RT-qPCR）是一种分子生物学技术，通过实时荧光染料或探针追踪扩增的DNA或RNA分子，用于基因表达分析、病毒载量定量和基因突变检测等。它主要包括三个步骤：反转录、PCR扩增和荧光实时检测。
基本概述 RT-qPCR是一种分子生物学技术，结合了反转录和定量聚合酶链反应的方法。它主要用于分析RNA样本中特定基因的拷贝数，从而确定这些基因的表达水平。技术原理 反转录：该技术将RNA逆转成DNA，生成互补DNA。