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辣根过氧化物酶试剂的配制方法??!!
1、．需要的溶液和特殊设备 DAB，0．05mol／LTris缓冲液（pH7．6）；0．3％（W／V）氯化镍／水贮存液；30％过氧化氢；DPX。
2、辣根过氧化物酶（HRP）的配制方法如下： 配制0.5%的HRP溶液：将0.5 g HRP溶解在100 mL的磷酸盐缓冲液（PBS）中，用滤纸过滤除去未溶解的颗粒。 制作储备液：将上述0.5%的HRP溶液按照1：9的比例用PBS稀释，得到100 倍的储备液，可以分装保存在冰箱中，备用。
3、根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。戊二醛二步法原理：戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物。
4、标记抗体需要交联剂，如过碘酸钠和戊二醛，通过特定的化学反应将酶与抗体结合。改良过碘酸钠法步骤如下：将5mg HRP与DNFB溶液混合，封闭非活性氨基酸，随后与过碘酸钠反应，形成醛基与抗体的连接。反应后加入乙二醇终止氧化，透析去除未结合物，然后加入抗体进行透析和沉淀。
5、首先，从新鲜辣根中提取酶，通过水抽提和洗涤，然后使用硫酸铵进行分级分离，去除杂质。接着，酶液通过丙酮分级分离，进一步纯化，通过透析除盐和冷冻干燥得到高纯度的辣根过氧化物酶。这种酶分子量约为40，000，含有亚铁血红素，其特性包括易溶于水和特定的pH范围，以及较低的氧化还原电势。
6、首先应该确定要配制溶液的质量和硫酸二氢铵的含量。假设要配制1000克溶液，配制用的硫酸二氢铵的含量是99%。需要99%的磷酸二氢铵的质量是1000×0.5%/0.99=05克 即称取05克99%的磷酸二氢铵，与水配制成1000克溶液即可。
凋亡的形态观测
1、在对细胞凋亡形态学进行观察时，有多种显微镜技术可供使用。首先，普通光学显微镜下，通过苏木素-伊红染色，凋亡细胞的特征表现为细胞核固缩碎裂，呈现蓝黑色，而胞浆则染成淡红色。正常细胞核颜色均匀，坏死细胞核则颜色变浅或消失。
2、形态学观察细胞凋亡的变化是多阶段的，细胞凋亡往往涉及单个细胞，即便是一小部分细胞也是非同步发生的。
3、形态观察：通过显微镜观察细胞核的形态。凋亡细胞中，由于DNA的降解，形成的DNA片段较短，电泳时会迅速移动，使细胞核呈现出彗星状的形态。正常的细胞核由于DNA完整，电泳时保持圆球形。分析和判断：根据细胞核的形状和荧光染色情况，判断细胞的凋亡情况。
4、细胞凋亡的形态学检测 根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒置显微镜 （1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。 （2） 染色细胞：常用姬姆萨染色、瑞氏染色等。
5、细胞凋亡的形态学检测根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。1 光学显微镜和倒置显微镜（1） 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
配制DAB时,过滤时需要避光吗?DAB染色时需要避光吗?DAB染色的原理?染色...
配制以及过滤是最好避光或者在光线较暗的地方迅速进行；原理：DAB即二氨基联苯胺是过氧化物酶的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。
DAB避光，是因为临用前在配好的DAB加双氧水，双氧水见光分解，如果你是长时间使用，或者染色时间长一定要避光。
β半乳糖苷酶染色工作液配制时需要避光的。在制备β-半乳糖苷酶染色工作液时，需要避光操作。这是因为β-半乳糖苷酶对光敏感，暴露在光线下会导致酶的活性降低或失活。为了保持β-半乳糖苷酶的活性和稳定性，可以采取以下措施：制备工作液时，在避光条件下进行操作，使用暗房或遮光罩等设备。