DNA提取(粗提取)酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb 甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。
盛放鸡血细胞液的容器,最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。获取较纯净的DNA的关键步骤。
粗提取用氯化钠溶液,在0.14mol/L时DNA溶解低,在2mol/L时溶解高,先将氯化钠溶液调到2mol/L后溶解DNA,之后加水到0.14mol/L,使得DNA分子析出,还可以将提出来的DNA分子溶于酒精,DNA分子不溶在酒精中,部分蛋白质溶解。鉴定是在DNA中加入二苯胺,如果呈现蓝色则说明DNA的存在,不能用健那绿。
TTBS缓冲液 称取三羟甲基氨基甲烷05g、氯化钠5g,吸取聚山梨酯80 0.55ml,加适量水溶解,用盐酸调pH值至5,加水稀释至500ml。4℃保存。 (4)底物缓冲液 称取3,3二氨基联苯胺盐酸盐(DAB)15mg,取甲醇5ml、30%过氧化氢15μl,溶于25ml TTBS缓冲液中。用前配制。
醋酸盐缓冲液(pH5) 取醋酸铵25g,加水25ml溶解后,加7mol/L盐酸溶38ml,用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至5(电位法指示),用水稀释至100ml, 即得。醋酸-锂盐缓冲液(pH0) 取冰醋酸50ml,加水800ml混合后,用氢氧化锂调节pH 值至0,再加水稀释至1000ml,即得。
缓冲液是一种能在加入少量酸或碱和水时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值,正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动,而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系,它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。
缓冲溶液有:磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris(三羟甲基氨基甲烷)等等。硼酸盐:硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。柠檬酸盐:柠檬酸盐离子容易与钙结合,所以存在有钙离子的情况下不能使用。
1、Tris-HCl缓冲液的配制方法有两种:方法一:分别配制0.05 mol/L Tris和0.05 mol/L HCl溶液。按常用表中所列体积混合即可。由于标准浓度的稀盐酸不易配制,所以常用另一种方法 方法二:先称111 g Tris碱溶于950 mL~970 mL去离子水中,边搅拌边滴加4 N HCl。
2、Tris-HCl缓冲液的配制方法:使50ml 0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与x ml 0.1mol/L 盐酸混匀后,加水稀释至100ml即可配置成功。三羟甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)aminomethane,一般简称为Tris)是一种有机化合物,其分子式为(HOCH2)3CNH2。
3、确定所需浓度和体积 首先需要确定缓冲液所需的浓度和总体积。常见的TRIS-HCl缓冲液浓度范围为10mM至500mM。准备主要试剂与材料 Tris碱粉末; 浓盐酸; 蒸馏水或去离子水; 适当的容器和搅拌器具。
4、配制步骤 溶解tris碱于去离子水中,加热有助于溶解。 冷却至室温后,加入适量的HCl调节pH至目标值。 用去离子水定容至所需体积。 搅拌均匀后,进行过滤或使用滤纸过滤杂质。 储存于密闭容器中,避免长时间暴露在空气中以防污染。
5、tris hcl缓冲液配方如下:1M Tris-HCl(pH 4,6,0)配制1000ml 配制方法:称量121g Tris置于1000ml烧杯中。加入约800ml的去离子水,充分搅拌橡昌溶解。按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。将溶液定容至1000ml。高温高压灭菌后,室温保存。
参加竞赛和讨论:参加化学竞赛和课堂讨论可以激发学习兴趣,提高学习效果。通过与他人交流,可以发现自己的不足之处,及时调整学习方法。建立良好的学习习惯:学好有机化学需要持之以恒的努力,要养成定时复习、预习的习惯,保持良好的作息时间,保证充足的睡眠。
认识有机物的空间结构了解其对称特点,在讨论有机物的共线、共面、一元氯代物等问题是很重要的。 总之,《有机化学》是化学的一个重要分支,有其自身的特点和性质,不同于无机化学,应用一个全新的视角来看待《有机化学》,掌握适当的学习方法,会给你的学习带来事半功倍的效果。
自学的话书本要多看,弄懂每步的反应原理(反应机理),注意归纳,比如不同的溴试剂都可以应用于哪些反应。掌握规律,比如酯化反应就是“酸脱羟基醇脱氢”,催化剂一律是浓硫酸加热可逆。有机其实基本不用听,看书一般都能懂,只有实在不会的时候再问一下。
结构决定性质——学习有机化学的法宝 有机化学的中心问题是结构与性质的关系问题,把握结构与性质的关系是学好有机化学的法宝。从有机物的结构特征出发,可以很好地理解有机化合物的主要性质包括物理性质和化学性质。从物理性质看:烃一般是非极性或弱极性的分子。
整理方程式,把有机方程式全部整理一遍,以课本为主。着重把各个反应的条件背一背(化学还是方程式!)2,整理错题(重在思路方法,题目长的裁卷子)3,化学还是要记的。